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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩不出来，请问这是什么原因
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liufang1006

木虫 (正式写手)

[求助] PCR扩不出来，请问这是什么原因 已有5人参与

我用的反应体系是10ul的，具体如下：
水：7.2
buffer：1
dNTP:0.8
模板：0.5
引物：0.2
taq酶：0.1
扩出来结果如图所示，请大家帮我分析分析一下？

PCR扩不出来，请问这是什么原因
Image0.5ul-4.5+5.1.jpg
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风雨无悔人生路！没有吃不了的苦，只有享不了的福！
1楼 2014-06-11 10:08:51
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liug268

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-11 12:26:30
liufang1006: 金币+1 2014-06-12 09:03:07
在不知道模板，引物和扩增片段长度等情况的条件下，只能说引物二聚体比较严重。
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2楼2014-06-11 10:12:26
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-11 12:26:37
liufang1006: 金币+2 2014-06-12 09:10:31
二聚体严重，可能是退火温度的问题
当然也不排除是引物问题

看你上面的胶是跑出来了，条带不明显

你可以换下模板试下
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天行健
3楼2014-06-11 11:10:57
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wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 20:59:18
1.更换模板
2.更换了模板还是这样的话，重新设计引物吧
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4楼2014-06-11 21:46:42
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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liufang1006(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 08:56:59
应该是退火温度太低，适当提高温度

[ 发自小木虫客户端 ]
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好好学习
5楼2014-06-11 22:04:18
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liufang1006(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 08:57:06
你加的东西看不出问题。pcr关键的条件是引物Tm值和退火温度的关系。另外你也没有透露目的条带大小和你的延伸时间。
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6楼2014-06-12 00:03:19
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liufang1006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junior850621 at 2014-06-12 00:03:19
你加的东西看不出问题。pcr关键的条件是引物Tm值和退火温度的关系。另外你也没有透露目的条带大小和你的延伸时间。

我的目的条带是260，mark中最亮的是250，延伸时间是30s
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风雨无悔人生路！没有吃不了的苦，只有享不了的福！
7楼2014-06-12 09:10:04
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liufang1006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-11 11:10:57
二聚体严重，可能是退火温度的问题
当然也不排除是引物问题

看你上面的胶是跑出来了，条带不明显

你可以换下模板试下

谢谢，我将模板稀释后就扩出来了
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风雨无悔人生路！没有吃不了的苦，只有享不了的福！
8楼2014-06-12 09:11:22
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蜗牛ccw

新虫 (初入文坛)
可能引物的问题
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9楼2014-06-30 09:55:54
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