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wslwsl521

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增出一次再扩增不出来

之前用一种PCR体系扩增出自己和别人的条带。然后用同样的条件就扩增不出来了。然后重新换了一种体系,能p出来,但是P出来一次之后,再重新P又P不出来了。哪位高手指点一下,是什么原因造成的。
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chiden

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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每次换体系就可以P出来了吗?第二次就完全没有条带了?还是条带不好,只是部分有呢?
即使难过,也要微笑着走下去
2楼2012-06-09 22:42:26
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nemo88

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流,今天很活跃嘛 2012-06-11 13:57:03
本帖内容被屏蔽

3楼2012-06-09 22:48:41
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果条件都一致,试剂材料都没有换,那么前后两次PCR的时间间隔有多久?个人觉得是材料可能有些问题,比如模板,引物,等
人生不是一场物质的盛宴,而是一次灵魂的修炼,使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
4楼2012-06-11 10:08:27
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-11 13:57:17
1:体系是不是变化了,我得过50ul体系P不出来,25ul体系P的出来的情况.
2:确定引物,酶是不是失活了
3:PCR仪器不同,结果也会有一点不太一样,但是可能性不大
所以,试试1,2吧.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-06-11 10:47:20
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生物大虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-11 17:28:09
第一次你P不出来是体系的问题,第2次你重新设计体系P了几次?每次都P不出来吗?你把体系的各种成分重新换新的再P,逐一排查可能造成该结果的因素吧,依我的经验极大可能是DNA模版、引物反复溶融降解了~~
谋事在人成事在天
6楼2012-06-11 17:12:04
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stlion223

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是否做了胶回收?那样做模板就很难被P出来...
那么多的玻璃鞋很多人适合没有独一无二
7楼2012-06-12 12:10:36
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换PCR用的东西。先换水,逐个排除。一般不会是引物的问题。
8楼2012-06-12 14:19:31
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉是不是你的模板或者引物出问题了。。你重新换一批试试呢,另外你换一个体系试试你的酶没有问题吧。。
9楼2012-06-12 18:06:58
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云破月来xxz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉应该是你的酶或者是引物,模板加少了,体系不同有时出来有时不出来。
做好自己
10楼2012-07-23 20:23:00
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