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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增出一次再扩增不出来
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wslwsl521

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增出一次再扩增不出来

之前用一种PCR体系扩增出自己和别人的条带。然后用同样的条件就扩增不出来了。然后重新换了一种体系，能p出来，但是P出来一次之后，再重新P又P不出来了。哪位高手指点一下，是什么原因造成的。
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1楼 2012-06-09 09:58:17
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chiden

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每次换体系就可以P出来了吗？第二次就完全没有条带了？还是条带不好，只是部分有呢？
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即使难过，也要微笑着走下去
2楼2012-06-09 22:42:26
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，今天很活跃嘛 2012-06-11 13:57:03
本帖内容被屏蔽
3楼2012-06-09 22:48:41
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果条件都一致，试剂材料都没有换，那么前后两次PCR的时间间隔有多久？个人觉得是材料可能有些问题，比如模板，引物，等
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
4楼2012-06-11 10:08:27
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-11 13:57:17
1：体系是不是变化了，我得过50ul体系P不出来，25ul体系P的出来的情况.
2：确定引物，酶是不是失活了
3：PCR仪器不同，结果也会有一点不太一样，但是可能性不大
所以，试试1,2吧.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-06-11 10:47:20
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生物大虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-11 17:28:09
第一次你P不出来是体系的问题，第2次你重新设计体系P了几次?每次都P不出来吗？你把体系的各种成分重新换新的再P，逐一排查可能造成该结果的因素吧，依我的经验极大可能是DNA模版、引物反复溶融降解了~~
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谋事在人成事在天
6楼2012-06-11 17:12:04
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stlion223

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是否做了胶回收？那样做模板就很难被P出来...
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那么多的玻璃鞋很多人适合没有独一无二
7楼2012-06-12 12:10:36
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换PCR用的东西。先换水，逐个排除。一般不会是引物的问题。
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8楼2012-06-12 14:19:31
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉是不是你的模板或者引物出问题了。。你重新换一批试试呢，另外你换一个体系试试你的酶没有问题吧。。
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9楼2012-06-12 18:06:58
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云破月来xxz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉应该是你的酶或者是引物，模板加少了，体系不同有时出来有时不出来。
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做好自己
10楼2012-07-23 20:23:00
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