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一路向前看

铁虫 (初入文坛)

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[交流] western blot出现多条带是什么原因

一抗是兔多抗，稀释度1:800；二抗1:3000，上样大约40ug，TBST洗膜3*10min，结果如图出现明显三条带（大约110、100、85KD），另外还有些微弱的条带，这个蛋白目前没人做过，预测的分子量是63kd，实际分子量未见报道，请问这是什么原因造成的？是蛋白量太大？抗体浓度太高？应该选用哪一条带？求高手解答

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1楼 2014-06-11 09:26:17

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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

专家经验: +218
BioEPI: 11
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性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

可能原因：
1.封闭不好。5%脱脂奶粉或者3%BSA或质量不好，或者用量不足，或者时间不够等。
2.一抗的浓度过大，引起抗体与非抗体的特异性识别的抗原也发生了一定程度上的相互作用，这时洗膜是洗不下去的。
3.抗体质量不高。至少一抗应该用单克隆抗体，其识别的抗原免疫簇位点不是唯一的。而一抗若为多克隆抗体，则是是一群抗体的组合，因为多克隆抗体的识别的抗原免疫簇位点不是唯一的，一抗可能与非目的抗原也会存在抗原识别。

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8楼2014-07-07 23:29:02

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