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1990xuxiao银虫 (正式写手)
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[求助]
关于酵母基因敲除
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| 我最近在做酵母基因敲除，敲除用的片段用的是目的基因的上下游同源片段，每个片段大小在250左右，将两个片段分别插入到pMD18T中，片段的方向与目的片段的一致，两个片段间距离只有十几bp间隔，电转入酵母后，在五氟乳清酸平板上生长出几个克隆，划线于MD和MD-ura平板上，前者只有划线的痕迹，后者能够迅速生长，但提基因组和菌落直接PCR批出来的片段都是原长750bp的，请问这样的片段能够通过单交换或者双交换进行同源重组吗？另外补充一点，这个酵母产品说明书上说是包含了spores，是不是有可能是双倍体呢，那么只是敲出了一半的话也应该批出两个片段来呀！希望大家帮忙参考参考！ |
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