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1990xuxiao

银虫 (正式写手)

[求助] 关于酵母基因敲除

我最近在做酵母基因敲除,敲除用的片段用的是目的基因的上下游同源片段,每个片段大小在250左右,将两个片段分别插入到pMD18T中,片段的方向与目的片段的一致,两个片段间距离只有十几bp间隔,电转入酵母后,在五氟乳清酸平板上生长出几个克隆,划线于MD和MD-ura平板上,前者只有划线的痕迹,后者能够迅速生长,但提基因组和菌落直接PCR批出来的片段都是原长750bp的,请问这样的片段能够通过单交换或者双交换进行同源重组吗?另外补充一点,这个酵母产品说明书上说是包含了spores,是不是有可能是双倍体呢,那么只是敲出了一半的话也应该批出两个片段来呀!希望大家帮忙参考参考!
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