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园园补补

铁虫 (小有名气)

[求助] 为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 已有13人参与

提取RNA快一年时间了,之前提取效果一直很好,可是近两次却出现了出题:用Trizol提取RNA,加入异丙醇离心后就会出现一坨白色沉淀,用75%乙醇洗涤沉淀离心后依旧有很明显的白色沉淀,检测的A260/A280比值低于1.8,A260/A230比值低于2.0,(之前的实验没有出现过很明显的白色沉淀,而且A260/A280和A260/A230比值都很正常)。。。很困惑,实验没办法进行了。。。
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铁虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 14:43:40
楼主,请仔细看下我们的步骤:
按照TRizol一步法制备总RNA,其步骤简述如下:取膜荚黄芪的叶片500 mg,于液氮预冷的研钵中,液氮速冻后充分研磨成粉末,加入到加有5 mL TRizol的15 mL离心管中,混匀,室温放置5 mi ...

方法其实都是大同小异,我之前就是用Trizol一步法制备,都没出现过这种白色沉淀现象,只是最近两次才出现的,会不会是我用的试剂出现问题了或是被污染了。。。
4楼2014-05-28 09:34:37
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园园补补

铁虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-27 15:13:23
很明显,那陀东西不是你要的RNA咯,一般是糖没有除干净。

是否可以用氯仿再次抽提一下
5楼2014-05-28 09:35:06
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铁虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-28 09:56:38
那就重新配药品吧,用DEPC处理过的水,可能有污染了...

打算试试。。。
8楼2014-05-28 14:23:31
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铁虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-28 11:06:12
除糖一般是加盐的
...

什么?可以具体点儿不
9楼2014-05-28 14:24:14
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铁虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by hailey at 2014-05-28 16:13:14
我也怀疑楼主所用东西污染了。。

感谢,最近打算再试试,实践出真知
11楼2014-05-28 19:54:22
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铁虫 (小有名气)

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13楼: Originally posted by caitlin0626 at 2014-05-29 16:45:04
有蛋白质沉淀吧,之前讲过那个比值的含义的,我忘了,楼主查一下就知道是不是蛋白质污染了!

应该是。。。
16楼2014-06-03 14:02:16
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铁虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by anmengqu at 2014-05-31 09:22:47
应该是有蛋白的沉淀,我以前在做RNA提取的时候,一旦出现白色沉淀过多一般情况下RNA提出了的质量都不好。用氯仿再多抽提一次,但要保证操作要访RNA酶,因为每多操作一次就增加一分被污染的危险,不要到最后蛋白除掉 ...

谢谢,再试试
17楼2014-06-03 14:02:51
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铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-28 09:56:38
那就重新配药品吧,用DEPC处理过的水,可能有污染了...

试剂都重新换过了,还是出现了一坨白色沉淀,怎么办。。。
18楼2014-06-07 11:46:11
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铁虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by anmengqu at 2014-05-31 09:22:47
应该是有蛋白的沉淀,我以前在做RNA提取的时候,一旦出现白色沉淀过多一般情况下RNA提出了的质量都不好。用氯仿再多抽提一次,但要保证操作要访RNA酶,因为每多操作一次就增加一分被污染的危险,不要到最后蛋白除掉 ...

原因找到了,是trizol试剂被污染了,现在好了
23楼2014-06-14 10:14:26
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