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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀
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园园补补

铁虫 (小有名气)

[求助] 为什么提取RNA时出现一坨白色沉淀 已有13人参与

提取RNA快一年时间了，之前提取效果一直很好，可是近两次却出现了出题：用Trizol提取RNA，加入异丙醇离心后就会出现一坨白色沉淀，用75%乙醇洗涤沉淀离心后依旧有很明显的白色沉淀，检测的A260/A280比值低于1.8，A260/A230比值低于2.0，（之前的实验没有出现过很明显的白色沉淀，而且A260/A280和A260/A230比值都很正常）。。。很困惑，实验没办法进行了。。。
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1楼 2014-05-27 14:34:23
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
4楼: Originally posted by 园园补补 at 2014-05-28 09:34:37
方法其实都是大同小异，我之前就是用Trizol一步法制备，都没出现过这种白色沉淀现象，只是最近两次才出现的，会不会是我用的试剂出现问题了或是被污染了。。。...

那就重新配药品吧，用DEPC处理过的水，可能有污染了
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
6楼2014-05-28 09:56:38
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 19:04:44
楼主，请仔细看下我们的步骤：
按照TRizol一步法制备总RNA，其步骤简述如下：取膜荚黄芪的叶片500 mg，于液氮预冷的研钵中，液氮速冻后充分研磨成粉末，加入到加有5 mL TRizol的15 mL离心管中，混匀，室温放置5 min，使其充分裂解12 000 rpm，离心5 min，弃沉淀。加入1mL氯仿，震荡混和均匀后放于冰上15 min，于4 ℃，12000 rpm 离心15min。取上清液到新的离心管中，加入等量体积异丙醇，颠倒混合均匀，-20℃ 放置20 min以上，4 ℃，12 000 rpm离心10 min。去上清，加入5 mL 75 %冰乙醇，悬浮沉淀，4℃，12 000 rpm离心5 min，去上清，重复2次。在室温阴凉处空气干燥或真空干燥RNA沉淀。加入50 μL DEPC H2O溶解RNA，将抽提好的总RNA 保存于-70 ℃冰箱中。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 14:43:40
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 19:04:55
很明显，那陀东西不是你要的RNA咯，一般是糖没有除干净。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-05-27 15:13:23
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园园补补

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 14:43:40
楼主，请仔细看下我们的步骤：
按照TRizol一步法制备总RNA，其步骤简述如下：取膜荚黄芪的叶片500 mg，于液氮预冷的研钵中，液氮速冻后充分研磨成粉末，加入到加有5 mL TRizol的15 mL离心管中，混匀，室温放置5 mi ...

方法其实都是大同小异，我之前就是用Trizol一步法制备，都没出现过这种白色沉淀现象，只是最近两次才出现的，会不会是我用的试剂出现问题了或是被污染了。。。
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4楼2014-05-28 09:34:37
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