24小时热门版块排行榜    

查看: 4587  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lvsunjian

新虫 (小有名气)

[交流] His标签蛋白纯化后,有杂带 已有6人参与

菌液诱导表达过夜后,用PBS悬浮细胞,超声破碎。
离心后取上清液上柱(生工的柱子)。
用10ml, Ni-Native-0平衡;
上样;
再用5ml, Ni-Native-20洗脱,得到3管样品;
接下来用5ml, Ni-Native-250洗脱,得到4管样品;
结果如下:
Marker,阴性对照,阳性对照,N20-1,N20-2,N20-3,N250-1,N250-2,N250-3,N250-4,没管收集1ml。
我想知道,杂蛋白是如何去除的?是通过低浓度的Ni-Native逐步洗脱的还是?
用Ni-Native-0,20,50,100,250,我怕把样品都洗脱没了~

His标签蛋白纯化后,有杂带
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cascade900

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换个PH试试,wash体积大一些
9楼2014-05-28 15:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lvsunjian

新虫 (小有名气)

忘大家帮忙看下,楼主小虫一只,金币不多~
2楼2014-05-23 11:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
考虑再过个阴离子或阳离子柱,或硫酸铵分级沉淀等方法。
3楼2014-05-23 14:53:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
洗脱从20直接跳到250,这样的确很容易有杂蛋白的,可以在中间多加一些梯度,如50、100等等。还有你只用20洗了3次吗?为什么不多洗几次把多一点杂蛋白洗下来啊?
4楼2014-05-23 17:53:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 求材料,环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
请填处理意见