24小时热门版块排行榜    

查看: 4578  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lvsunjian

新虫 (小有名气)

[交流] His标签蛋白纯化后,有杂带 已有6人参与

菌液诱导表达过夜后,用PBS悬浮细胞,超声破碎。
离心后取上清液上柱(生工的柱子)。
用10ml, Ni-Native-0平衡;
上样;
再用5ml, Ni-Native-20洗脱,得到3管样品;
接下来用5ml, Ni-Native-250洗脱,得到4管样品;
结果如下:
Marker,阴性对照,阳性对照,N20-1,N20-2,N20-3,N250-1,N250-2,N250-3,N250-4,没管收集1ml。
我想知道,杂蛋白是如何去除的?是通过低浓度的Ni-Native逐步洗脱的还是?
用Ni-Native-0,20,50,100,250,我怕把样品都洗脱没了~

His标签蛋白纯化后,有杂带
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PI4K

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1. What's your buffer and pH?
2. purification condition? NaCl, temperature?
7楼2014-05-25 07:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lvsunjian

新虫 (小有名气)

忘大家帮忙看下,楼主小虫一只,金币不多~
2楼2014-05-23 11:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
考虑再过个阴离子或阳离子柱,或硫酸铵分级沉淀等方法。
3楼2014-05-23 14:53:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
洗脱从20直接跳到250,这样的确很容易有杂蛋白的,可以在中间多加一些梯度,如50、100等等。还有你只用20洗了3次吗?为什么不多洗几次把多一点杂蛋白洗下来啊?
4楼2014-05-23 17:53:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +6 α____ 2026-03-22 7/350 2026-03-24 19:46 by sunjie8888
[考研] 085602 289分求调剂 +5 WWW西西弗斯 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:51 by jhhcooi
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 求材料,环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见