应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的基因的表达
111/2返回列表12下一页
查看: 1737  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 目的基因的表达 已有1人参与

我需要做目的基因的表达，现在已经克隆完成，回收质粒后，总是感觉质粒的浓度不够高，所以在双酶切后（由于没有通用缓冲液，所以是在分别酶切），感觉产物浓度更低，有时电泳条带都看不清。
   那我可以直接用克隆回收后的质粒作为PCR模板，经过扩增后，电泳回收产物，再将这个产物作为底物来进行双酶切操作以及后续与表达载体的连接吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-22 16:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

for5

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-05-24 09:55:08
既然这样可以，那为什么不可以直接在最初PCR后就进行酶切然后与表达载体的连接。。而是要通过与克隆载体连接后在进行后续表达实验呢？

实验新手，，谢谢指导啊...

本来就可以的啊。很多人就这么做。至于先克隆到t载体等扩增载体是由于连接相对容易，而直接连接表达载体要难一点。到扩增载体后可以快速测序，从而调整实验。这些个找周围实验室的问问不就很快就好了，就这么不好意思问。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
操蛋的XX
9楼2014-05-24 10:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

而得名

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by for5 at 2014-05-24 10:14:54
本来就可以的啊。很多人就这么做。至于先克隆到t载体等扩增载体是由于连接相对容易，而直接连接表达载体要难一点。到扩增载体后可以快速测序，从而调整实验。这些个找周围实验室的问问不就很快就好了，就这么不好意 ...

浓度低可以做的啊，我经常这样做的啊，有时候跑胶都看不清楚，实验结果还挺好。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-05-24 11:23:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-22 19:25:00
呀薯条: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-23 11:54:18
那就质粒多提一点，胶回收好好做，回收率会高不少。浓度低点也可以做连接，只要基因和载体切干净就好，连接就是概率问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
操蛋的XX
2楼2014-05-22 16:22:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-05-22 16:22:13
那就质粒多提一点，胶回收好好做，回收率会高不少。浓度低点也可以做连接，只要基因和载体切干净就好，连接就是概率问题。

那要是以回收的质粒为模板做个PCR，再电泳回收产物，然后再进行后续的酶切、连接等这样的做法可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-22 18:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for5

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 呀薯条 at 2014-05-22 18:10:53
那要是以回收的质粒为模板做个PCR，再电泳回收产物，然后再进行后续的酶切、连接等这样的做法可以吗？...

可以的啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
操蛋的XX
4楼2014-05-22 18:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)
可以，不过你到后来还要再测序，保证序列正确就可以
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-23 06:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by for5 at 2014-05-22 18:13:25
可以的啊
...

既然这样可以，那为什么不可以直接在最初PCR后就进行酶切然后与表达载体的连接。。而是要通过与克隆载体连接后在进行后续表达实验呢？

实验新手，，谢谢指导啊
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-24 09:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by for5 at 2014-05-22 18:13:25
可以的啊
...

既然这样可以，那为什么不可以直接在最初PCR后就进行酶切然后与表达载体的连接。。而是要通过与克隆载体连接后在进行后续表达实验呢？

实验新手，，谢谢指导啊
赞一下 回复此楼
7楼2014-05-24 09:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-23 06:06:06
可以，不过你到后来还要再测序，保证序列正确就可以

既然这样可以，那为什么不可以直接在最初PCR后就进行酶切然后与表达载体的连接。。而是要通过与克隆载体连接后在进行后续表达实验呢？

实验新手，，谢谢指导啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-05-24 09:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 呀薯条 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +5 想上学吖吖 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:56 by 23Postgrad
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +5 Doleres 2026-03-19 5/250 2026-03-19 20:14 by 制度的
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 12/600 2026-03-19 16:17 by 脱颖而出
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 材料专硕英一数二306 +5 z1z2z3879 2026-03-18 5/250 2026-03-19 07:43 by BruceLiu320
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭