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547star

木虫 (著名写手)

[求助] 如何插入内含子到目的基因?

虽然分析序列的时候知道各种内含子,但想挪一个过来插入到另一个基因的时候要按照什么原则,完全不懂,生怕mRNA不能剪切好,得不到目的蛋白。请路过的大侠出手指点一二。
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为什么
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
547star: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢!!! 2013-08-05 00:41:20
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 13:30:56
我理解的是你要把基因Y的某个内含子放在基因X里面. 内含子注意两端的序列就行了, 多半是GT开始, AG结束.
如果基因X本来就有内含子的话你可以替换的办法. 如果一定要放在某个exon的里面....请有经验虫子出来帮忙
2楼2013-08-04 23:12:39
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Sthunder

木虫 (正式写手)

能告知你插入内含子的目的吗?
互助互励,共奋共进!!
3楼2013-08-05 04:38:48
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547star

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-05 04:38:48
能告知你插入内含子的目的吗?

避免克隆过程中在大肠杆菌表达等。
为什么
4楼2013-08-05 07:55:24
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 13:31:16
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2013-08-05 07:55:24
避免克隆过程中在大肠杆菌表达等。...

你是在植物中表达?那样的话就没意义了哈,因为植物启动子在e.coli中是不会启动的,其次,如果你的启动子在e.coli中能被启动的话,你插入exon也没有用,它也会表达出一个蛋白来。最重要的是,如果你有其他特殊目的的话,必须要个exon,你为什么不在gDNA上P呢,这样的话,不就直接得到一个含exon的序列。再说,如果你只想要某一个exon的话,也可以分段PCR,含exon部分用gDNA为模板,其他部分用cDNA为模板,然后两端做个重叠PCR就OK了!
互助互励,共奋共进!!
5楼2013-08-05 09:16:45
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547star

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-05 09:16:45
你是在植物中表达?那样的话就没意义了哈,因为植物启动子在e.coli中是不会启动的,其次,如果你的启动子在e.coli中能被启动的话,你插入exon也没有用,它也会表达出一个蛋白来。最重要的是,如果你有其他特殊目的 ...

。至于你肯定的事情,我不认同,首先表达的蛋白不会相同,内含子有终止密码子的会提前终止翻译,插入内含子也会影响读码框,我的目的基因本来就没有内含子。
如果可以,请针对我1楼的问题回答。
为什么
6楼2013-08-05 10:52:04
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