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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量pcr重复性问题
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr重复性问题 已有2人参与

最近做荧光定量PCR，不同批次的细胞的cdna做出来的趋势不大一样，纠结啊，复孔的误差都小于0.3.。。。 溶解曲线也还好。用的是双deta T的方法。内参用的是GAPDH。机子是罗氏的。。。
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1楼 2014-05-08 21:33:38
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-09 10:38:22
趋势不大一样是什么意思，只要不是完全相反，只是变化的强弱有所不同的话，那么数据基本就是可用的。
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-08 21:42:11
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 21:42:11
趋势不大一样是什么意思，只要不是完全相反，只是变化的强弱有所不同的话，那么数据基本就是可用的。

趋势不大一样就是有的时候是增强表达，有的时候是抑制表达。。。有的是完全相反的，最夸张的最近两天做了同一批次的cdna竟然也出现了相反的情况,崩溃。。。。不过引物和cdna都是新稀释的。。。。
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3楼2014-05-10 09:51:38
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筑梦求知

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我做的也这样，用相同的材料做了几次，都不相同，郁闷啊

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4楼2014-05-22 16:42:46
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筑梦求知

铜虫 (初入文坛)
你怎么解决的？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-05-22 16:43:24
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 筑梦求知 at 2014-05-22 16:43:24
你怎么解决的？

还没解决，怀疑是每次做，目的与内参扩增效率不同的问题。。。你用的是双detaT的方法么。。。对你的引物做过标准曲线么
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6楼2014-05-25 01:24:57
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