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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr重复性问题 已有2人参与

最近做荧光定量PCR,不同批次的细胞的cdna做出来的趋势不大一样,纠结啊,复孔的误差都小于0.3.。。。 溶解曲线也还好。用的是双deta T的方法。内参用的是GAPDH。机子是罗氏的。。。
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-09 10:38:22
趋势不大一样是什么意思,只要不是完全相反,只是变化的强弱有所不同的话,那么数据基本就是可用的。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-08 21:42:11
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 21:42:11
趋势不大一样是什么意思,只要不是完全相反,只是变化的强弱有所不同的话,那么数据基本就是可用的。

趋势不大一样就是有的时候是增强表达,有的时候是抑制表达。。。有的是完全相反的,最夸张的最近两天做了同一批次的cdna竟然也出现了相反的情况,崩溃。。。。不过引物和cdna都是新稀释的。。。。
3楼2014-05-10 09:51:38
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筑梦求知

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我做的也这样,用相同的材料做了几次,都不相同,郁闷啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-05-22 16:42:46
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筑梦求知

铜虫 (初入文坛)

你怎么解决的?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-05-22 16:43:24
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 筑梦求知 at 2014-05-22 16:43:24
你怎么解决的?

还没解决,怀疑是每次做,目的与内参扩增效率不同的问题。。。你用的是双detaT的方法么。。。对你的引物做过标准曲线么
6楼2014-05-25 01:24:57
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