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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事？
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天心擎亮

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事？ 已有4人参与

做PCR时，不加模板DNA的对照CK中跑出了与目的片段大小相近的条带（下图的第12与11泳道），这是什么原因，该怎么避免？

PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事？
第十二泳道.jpg


PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事？-1
第十一泳道.jpg
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1楼 2014-05-08 21:12:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天心擎亮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-09 09:26:31
没有数错的话，你所说的12和11泳道的条带与你的目标条带也不一样大啊，而且很弱，通过调节DNA的上样量和拍照时的曝光时间，这个完全可以去除，不影响你的实验

PS，从专业的角度来讲，你应该标出你认为有矛盾的地方，至少12和11泳道用个箭头指出吧
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2楼2014-05-08 21:47:33
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badman20

木虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-05-09 09:27:15
上样的时候漂样了吧？
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3楼2014-05-08 22:25:28
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
污染的结果，应该不是PCR的问题
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5楼2014-05-09 03:42:39
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
天心擎亮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-12 18:04:11
这个对照不需要加，只要保证你P出来的东西和Marker比大小一致就可以了，LZ想通过这个对照来说明什么问题？你的试剂能用和操作规范？~，事实上你的EP管包括各部分都有可能影响，只要存在几pmol的模板就能P出来东西，所以这个对照没必要做的。
至于漂样，只可能你第十一个孔的样品飘到第十二个孔去了，但是这两个孔跑出来的大小都不一样，应该不会是漂样
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大家相互帮助哈
9楼2014-05-12 17:18:27
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萧洛晗

银虫 (正式写手)
我昨天也是的，阴性对照居然有条带，实在是太神奇了。
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自天佑之，吉无不利
10楼2014-05-12 21:39:54
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普通回帖

天心擎亮

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by badman20 at 2014-05-08 22:25:28
上样的时候漂样了吧？

哎！还真是，我记得胶孔有点浅，我上样的时候不小心打出了气泡来着，也没太在意，现在想想还真有可能，真是说到点上了，厉害
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4楼2014-05-08 22:58:31
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天心擎亮

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-09 03:42:39
污染的结果，应该不是PCR的问题

你说的污染是指的哪方面？我引物换成新的，水和taq酶也换了，在第一张图中用的是第一次，第二张图中是第二次，枪头灭过菌的，也是用一个换一个，枪也擦过，就差换人了，请说的具体一点，您指的是什么的污染？
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6楼2014-05-09 10:42:27
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天心擎亮

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 21:47:33
没有数错的话，你所说的12和11泳道的条带与你的目标条带也不一样大啊，而且很弱，通过调节DNA的上样量和拍照时的曝光时间，这个完全可以去除，不影响你的实验

PS，从专业的角度来讲，你应该标出你认为有矛盾的地 ...

那你觉得移液器有没有可能污染呢？
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7楼2014-05-12 13:55:16
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gyesang

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引用回帖:
7楼: Originally posted by 天心擎亮 at 2014-05-12 13:55:16
那你觉得移液器有没有可能污染呢？...

不排除有这种可能
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2014-05-12 14:24:02
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