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天心擎亮

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事? 已有4人参与

做PCR时,不加模板DNA的对照CK中跑出了与目的片段大小相近的条带(下图的第12与11泳道),这是什么原因,该怎么避免?

PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事?
第十二泳道.jpg


PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事?-1
第十一泳道.jpg
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
天心擎亮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-09 09:26:31
没有数错的话,你所说的12和11泳道的条带与你的目标条带也不一样大啊,而且很弱,通过调节DNA的上样量和拍照时的曝光时间,这个完全可以去除,不影响你的实验

PS,从专业的角度来讲,你应该标出你认为有矛盾的地方,至少12和11泳道用个箭头指出吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-08 21:47:33
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badman20

木虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-05-09 09:27:15
上样的时候漂样了吧?
3楼2014-05-08 22:25:28
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
污染的结果,应该不是PCR的问题
5楼2014-05-09 03:42:39
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
天心擎亮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-12 18:04:11
这个对照不需要加,只要保证你P出来的东西和Marker比大小一致就可以了,LZ想通过这个对照来说明什么问题?你的试剂能用和操作规范?~,事实上你的EP管包括各部分都有可能影响,只要存在几pmol的模板就能P出来东西,所以这个对照没必要做的。
至于漂样,只可能你第十一个孔的样品飘到第十二个孔去了,但是这两个孔跑出来的大小都不一样,应该不会是漂样
大家相互帮助哈
9楼2014-05-12 17:18:27
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萧洛晗

银虫 (正式写手)

我昨天也是的,阴性对照居然有条带,实在是太神奇了。
自天佑之,吉无不利
10楼2014-05-12 21:39:54
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普通回帖

天心擎亮

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by badman20 at 2014-05-08 22:25:28
上样的时候漂样了吧?

哎!还真是,我记得胶孔有点浅,我上样的时候不小心打出了气泡来着,也没太在意,现在想想还真有可能,真是说到点上了,厉害
4楼2014-05-08 22:58:31
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天心擎亮

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-09 03:42:39
污染的结果,应该不是PCR的问题

你说的污染是指的哪方面?我引物换成新的,水和taq酶也换了,在第一张图中用的是第一次,第二张图中是第二次,枪头灭过菌的,也是用一个换一个,枪也擦过,就差换人了,请说的具体一点,您指的是什么的污染?
6楼2014-05-09 10:42:27
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天心擎亮

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 21:47:33
没有数错的话,你所说的12和11泳道的条带与你的目标条带也不一样大啊,而且很弱,通过调节DNA的上样量和拍照时的曝光时间,这个完全可以去除,不影响你的实验

PS,从专业的角度来讲,你应该标出你认为有矛盾的地 ...

那你觉得移液器有没有可能污染呢?
7楼2014-05-12 13:55:16
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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引用回帖:
7楼: Originally posted by 天心擎亮 at 2014-05-12 13:55:16
那你觉得移液器有没有可能污染呢?...

不排除有这种可能
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2014-05-12 14:24:02
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