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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA克隆遇到的问题
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文飞778899

银虫 (小有名气)

[求助] TA克隆遇到的问题 已有2人参与

载体pMD19-T Vector, DH5a感受态   蓝白斑筛选
实验组                                     载体 1ul  Insert DNA 2ul   水 2ul   solutionI 5ul  16度4小时
阳性对照（载体试剂盒内的control DNA)            载体 1ul  control DNA 1ul   水 3ul   solutionI 5ul  16度4小时
阴性对照（空载体）                         载体 1ul  Insert DNA  0 ul   水 4ul   solutionI 5ul  16度4小时
连接后转化涂板，37度过夜培养，第二天 三组板子全长满了密密麻麻地白色菌落，只有阴性对照有一个蓝斑，这是不是有可能我的抗生素失效了，X-GAL也失效了，要不菌落不可能都是很小密密麻麻的白斑没有蓝斑且阴性对照正常应该长蓝斑的啊？
急，求解惑
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1楼 2014-05-05 15:52:49
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
文飞778899(myprayer代发): 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-05-05 20:20:40
ta嘛，没必要蓝白斑，没必要做对照

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-05-05 16:36:45
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
文飞778899(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-05 20:20:44
文飞778899(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-05 20:20:51
文飞778899: 金币+2, ★有帮助 2014-05-06 17:39:44
三个板子都长出了密密麻麻的菌落（菌苔），基本可以判断是你平板上的抗生素失活了，重新倒板，倒板后测试一下
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-05 17:34:45
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文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-05 16:36:45
ta嘛，没必要蓝白斑，没必要做对照

那怎么确定有没有克隆进去？
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4楼2014-05-05 21:24:56
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 文飞778899 at 2014-05-05 21:24:56
那怎么确定有没有克隆进去？...

重涂板
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做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2014-05-06 21:51:57
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文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-05-06 21:51:57
重涂板...

对啊，蓝白斑涂板筛选阳性克隆比直接涂板不是挑选阳性克隆更清楚吗，还有其他更便捷的吗，能传授下吗？
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6楼2014-05-07 11:12:40
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 文飞778899 at 2014-05-07 11:12:40
对啊，蓝白斑涂板筛选阳性克隆比直接涂板不是挑选阳性克隆更清楚吗，还有其他更便捷的吗，能传授下吗？...

按你原来操作就行
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做一个阳光、开朗的小和尚
7楼2014-05-07 18:25:04
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