| 查看: 840 | 回复: 1 | |||
[求助]
SYBR green表达，扩增效率
|
| 用SYBR green相对定量，自己用5个梯度做标准曲线，目的基因的扩增效率只有87%，内参基因有92%，这两对引物可以做定量表达分析吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有14人回复
-
范进中举一文的中心思想
已经有5人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有17人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有15人回复
-
2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战
已经有5人回复
-
跳槽后在研项目怎么办？
已经有10人回复
-
什么时候开奖？
已经有10人回复
-
今天放榜吗？
已经有16人回复
-
93BebMhtakh前后11位开头都是大写
已经有8人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有26人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做基因表达采用荧光定量PCR的步骤
已经有3人回复
- 求高手指点，荧光定量PCR相对定量法的结果
已经有3人回复
- QPCR扩增曲线异常
已经有12人回复
- 关于SYBR Green I的问题
已经有4人回复
- SYBR 荧光定量PCR 阴性对照问题
已经有7人回复
- 实时荧光定量PCR过程问题
已经有11人回复
- SYBR green 1 real-time PCR 结果分析
已经有4人回复
- SYBR荧光定量PCR检测病毒的表达量，模版的要求
已经有11人回复
- 荧光定量扩增效率问题
已经有6人回复
- 荧光定量PCR与巢式PCR能结合吗？主要怕扩增出同源基因。
已经有4人回复
- 荧光定量pcr,以及内参基因的选择。
已经有4人回复
- 相对定量中怎样提高扩增效率
已经有5人回复
- 请教PCR高手，使用SYBR Green I法进行荧光定量PCR对于产物大小有什么要求？
已经有21人回复
- RT-qPCR实验问题
已经有23人回复
- 荧光定量sybrgreen染料荧光值大小的问题
已经有8人回复
- 定量PCR扩增效率过高(SYBR)
已经有3人回复
- 定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间？
已经有12人回复
- 实时荧光RT-PCR实验的相关问题
已经有8人回复
- 荧光定量PCR的扩增曲线很奇怪，什么原因
已经有7人回复
- 电泳用和PCR用的SYBR Green I有什么区别
已经有5人回复
- 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题
已经有8人回复
- 【分享】realtime pcr 个人经验分享
已经有41人回复
kellytan001
银虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 219.5
- 散金: 17
- 红花: 4
- 帖子: 260
- 在线: 22.7小时
- 虫号: 3108448
- 注册: 2014-04-02
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
【答案】应助回帖
| 荧光定量PCR分析基因表达有两种方法：1、是标准品法。这种方法要求有已经知道的拷贝数。不需要内参。不同拷贝数得到不同ct值。做出方程计算未知样品的拷贝数。2、是相对内参方法。这种方法要求内参，并且每组要分别对应内参，分析数据时将内参减去。不需要标准品。楼主说的标准曲线应该是这样理解的：对于PCR扩增，无法达到100%。所以为了保证反应体系具备很好的扩增效率（重点取决于引物的好坏），我们就尝试做标准曲线检测反应体系的扩增效率。delta delta统计方法的使用要求扩增效率达到95%-105%之间。3、扩增效率的做法：就是用任意一组的cDNA进行10浓度稀释，加入引物。一般为5-7个梯度，每个梯度为4个副孔。完成后pcr仪器会给你一个曲线和方程。求出斜率计算出扩增效率，严格上讲如果不在95%-105%之间是需要换引物的。 |
2楼2014-05-04 12:20:04
40