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wm阳光

新虫 (正式写手)

[求助] 提取片段太短已有1人参与

现在做黄水中DNA的提取,课提取出来的片段就在700-800bp,不能用于后续DGGE,请教在提取过程中怎么防止DNA片段的断裂
DNA提取方法:
黄水预处理:40ml黄水(6000r/min离心10min)------沉淀用TE缓冲液洗涤------向沉淀中加5mlTE
1、取0.8ml预处理黄水加500ulDNA抽提液、40ul (50mg/ml)溶菌酶、10ul(20ug/ml)蛋白酶K,37度水浴30min
2、加200ul 20%的SDS,65度水浴2h,每隔15min,颠倒摇匀
3、6000r/min l离心10min收集上清
4、沉淀加入500ul抽提液和200ulSDS,65度水浴10min
5、6000r/min离心10min,收集上清,合并上清
6、加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)摇匀,12000r/min离心10min,收集上清
7、向上清中加入酚:氯仿:异戊醇再抽提一次
8、加入0.6倍体积无水乙醇,4度沉淀1h
9、12000r/min离心10min,收集沉淀
10、遇冷的70%的乙醇洗涤沉淀,自然干燥
11、沉淀加50uiTE
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z441229642

铜虫 (小有名气)

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2楼2014-05-13 15:51:25
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