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wm阳光

新虫 (正式写手)

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专业: 食品科学基础

[求助] 提取片段太短已有1人参与

现在做黄水中DNA的提取，课提取出来的片段就在700-800bp，不能用于后续DGGE，请教在提取过程中怎么防止DNA片段的断裂
DNA提取方法：
黄水预处理：40ml黄水（6000r/min离心10min)------沉淀用TE缓冲液洗涤------向沉淀中加5mlTE
1、取0.8ml预处理黄水加500ulDNA抽提液、40ul （50mg/ml）溶菌酶、10ul(20ug/ml）蛋白酶K，37度水浴30min
2、加200ul 20%的SDS，65度水浴2h，每隔15min，颠倒摇匀
3、6000r/min l离心10min收集上清
4、沉淀加入500ul抽提液和200ulSDS,65度水浴10min
5、6000r/min离心10min,收集上清，合并上清
6、加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）摇匀，12000r/min离心10min,收集上清
7、向上清中加入酚：氯仿：异戊醇再抽提一次
8、加入0.6倍体积无水乙醇，4度沉淀1h
9、12000r/min离心10min,收集沉淀
10、遇冷的70%的乙醇洗涤沉淀，自然干燥
11、沉淀加50uiTE

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1楼 2014-04-24 15:22:24

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z441229642

铜虫 (小有名气)

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2楼2014-05-13 15:51:25