应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 空质粒双酶切出现非常相近的两条带？转化长满板？
51/1返回列表
查看: 2909  |  回复: 23
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)

[交流] 空质粒双酶切出现非常相近的两条带？转化长满板？

最近在做原核表达的构建，出现很多以前没见过的情况，各位虫友请帮忙想想什么原因：
1. 空载体约5400 bp，但提取后跑胶显示比15000 bp还要大，单酶切和双酶切后大小和载体实际大小相差不多，这是其一。
2 单酶切和双酶切后均会出现2条非常相近的条带，载体测过序没有问题，而且所选的酶切位点是载体上单一的
3.双酶切 连接转化后涂板，整板长满了菌就像抗性失效一样，后来我涂了不带抗性的菌证明平板抗性没有问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-04-17 12:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

唐tjg

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-17 13:50:42
你也做这个？唐tjg...

不做，我只是捡金币的，没看见人家不是散金
赞一下 回复此楼
做一个简单的人，踏实而务实，不沉溺幻想，不庸人自扰……
4楼2014-04-17 14:25:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐tjg at 2014-04-17 13:23:43

你也做这个？@唐tjg
回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-04-17 13:50:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落落_无尘

金虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
水墨蓝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-17 16:29:57
可能是你的一部分质粒没切开，所以电泳会有两条带。空质粒的多酶切位点处只有几个碱基，两个酶不容易接近。没切开的质粒转化就很容易长满板了。
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-17 15:19:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 落落_无尘 at 2014-04-17 15:19:01
可能是你的一部分质粒没切开，所以电泳会有两条带。空质粒的多酶切位点处只有几个碱基，两个酶不容易接近。没切开的质粒转化就很容易长满板了。

我用单个酶分别在通用缓冲液中且，能切出单一条带，但是单酶切的分子量比双酶切的分子量稍稍大些  ps：载体MCS测过序，证明序列没问题
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-17 16:08:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭