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韩元富豪

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专业: 微生物生理与生物化学

[求助] PCR产物，只有引物二聚体，，怎么办已有10人参与

小妹已经做了多次基因组DNAＰＣＲ，每次扩增出来的只有引物二聚体，连目标条带都没有，我设置的pcr参数是：
F1:2ul
F2:2ul
DNA模板：2ul
PCR Mix:25ul
ddH2O:19ul
两条引物的Tm分别是70.7、64.4，我设的ＰＣＲ的Ｔｍ是60，扩增出来只有引物二聚体.又用60的退火温度做了一次，还是只有引物二聚体，怎么办

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1楼2014-04-16 18:07:59

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引用回帖:

2楼: Originally posted by for5 at 2014-04-16 18:11:55
温度继续降，直到p出来为止。或者设一个touchdown的程序，设一个初始温度，一个降低温度以及一个终点温度

买的ＰＣＲ仪不能设置温度梯度，我用６５,６０　的退火温度，温度继续降，是为什么呢

7楼2014-04-16 20:57:59

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