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lavender2056新虫 (初入文坛)
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关于构建载体时加装内含子编码基因 已有1人参与
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| 用哺乳动物细胞中的载体来表达外源的真核生物的基因时，通常需要在载体上加装编码内含子的序列，但是真核生物的基因序列上通常都含有自己的内含子，为什么载体上还要再装？ |
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 分子生物学技术 |
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biostar2009
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-04-03 21:27:03
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lavender2056: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-04-05 13:53:32
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你注意到了一个有趣的现象，但是又忽视了一个简单的概念！ 一般而言，用载体表达一个基因，就是把这个基因的CDS区，或者你感兴趣的某一段CDS区，装到一个真核表达载体。所谓真核表达载体，就是有真核表达元件的一个质粒，一般有个启动子，还有个polyA信号。这样就可以实现这个基因的外源表达了。 正如你注意到的，真核生物基因一般都有很多内含子。这些内含子是真核生物mRNA表达的一个重要部分，虽然它们并不参与最终蛋白的编码，但是几乎参与pre-mRNA核内加工的很多步骤，而且这些步骤都是以耦连的方式发生的。 比如内含子的去除就与mRNA的出核相关，因为剪接的过程中很多结合到这段mRNA的很多蛋白是出核必须的。也就是说，如果一段RNA没有内含子，没有剪接这个过程，就很不容易出核。 这一点，正是外源表达的CDS的一个问题。这些强启动子驱动了大量的mRNA表达，但是出核的比例却相比内源基因低非常多，等于说是降低了最终表达蛋白的能力。 所以，很多“考究”的真核表达载体，会有一段称为IVE的序列，这个是intron的早期另一个叫法，这个序列来自非常清楚的基因的内含子，也就是说，从哪到哪会被剪接，非常清楚，不会担心伤害到有用的序列。 通过这么一个IVE，让这些RNA经历一下剪接，可以极大的促进他们的出核，也就可以增大最终蛋白合成的水平。 你可以找些材料继续学习。 |
2楼2014-04-03 19:21:55
3楼2020-07-01 16:20:37
