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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 有关浓缩质粒的问题
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关浓缩质粒的问题 已有5人参与

我前几天收到别的学校的老师给寄的质粒，是滴在滤纸上的那种。我把它剪碎之后，用75微升的双蒸水洗脱下来。昨天做的转化，可是一个平板上才长了两个菌落，所以，我想把它浓缩一下。
    可不可以把这75微升的质粒溶液滴在提质粒用的柱子上，然后吹干，再用20微升的水洗脱啊，这样做，质粒的损失会不会很大？
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1楼 2014-03-23 09:21:18
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-23 11:50:32
seven拂晓: 金币+1 2014-03-23 23:51:53
这样做的话，损失会很大，如果你可以找到一个speed-vac的东西，旋转然后蒸发。

或者你可以用乙醇沉淀的方法。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-03-23 10:56:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+4 2014-03-24 19:59:57
长两个菌落，已经足够你用了啊，你把那两个菌落培养上，然后抽质粒看看是不是你想要的，如果是了，就OK了，如果不是，再重新转化，用效率高些的感受态来做转化
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3楼2014-03-23 14:37:09
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+1 2014-03-23 23:51:34
seven拂晓: 金币+2 2014-03-24 19:59:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:53:46
两个克隆都有一个是对的就够了。

如果要浓缩的话，不需要柱子，只需要放在37摄氏度烘箱，放上一会儿，水分就蒸发了，短时间的温育不影响质粒的。
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4楼2014-03-23 20:44:36
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-03-23 14:37:09
长两个菌落，已经足够你用了啊，你把那两个菌落培养上，然后抽质粒看看是不是你想要的，如果是了，就OK了，如果不是，再重新转化，用效率高些的感受态来做转化

抽质粒怎么可以看出来是不是我想要的
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5楼2014-03-23 23:50:00
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-24 13:35:19
seven拂晓: 金币+1 2014-03-24 19:57:58
不能直接过柱子，柱子分离纯化质粒是有条件的，需要合理的酸碱度和盐离子浓度！直接按照上面的步骤来不行！直接用2.5倍体积乙醇和醋酸钠沉淀就好，或者简单点，如他们说的，在室温或37度放一段时间就行！菌落不多不知抗生素有没有弄错！或者感受态有有问题！建议多做对照排除！祝好运！

[ 发自小木虫客户端 ]
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
6楼2014-03-24 00:18:50
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-24 13:35:32
seven拂晓: 金币+1 2014-03-24 19:58:06
两个菌是阳性就可以了，你要过柱子的话估计再转两个菌都不一定长。你溶解在离心管里的质粒很少，越纯化越少。
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hehe
7楼2014-03-24 08:07:03
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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引用回帖:
5楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-03-23 23:50:00
抽质粒怎么可以看出来是不是我想要的...

不会，你想要的什么质粒都不知道吧，方法有很多啊，酶切，测序都可以啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2014-03-24 16:25:26
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gyesang at 2014-03-24 16:25:26
不会，你想要的什么质粒都不知道吧，方法有很多啊，酶切，测序都可以啊...

恩 还真是的 脑子秀逗了
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9楼2014-03-24 19:59:45
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