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爱的天使13

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓缩后出问题了，急求助

浓缩后目的条带那里出现了两条带，各位大神有没有遇到过此情况，怎么解决的
蛋白浓缩后出问题了，急求助
20140213 DEAE 蛋白大小余额48kDa .jpg


蛋白浓缩后出问题了，急求助-1
20140214 浓缩前后（第一条浓缩后，第二条浓缩前）.jpg
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1楼 2014-02-20 09:27:03
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
爱的天使13: 金币+2, ★有帮助 2014-02-20 20:08:22
爱的天使13(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:50
建议：
1.彻底清洗使用的浓缩管。可能是前一次使用留下的杂质
2.如果不行，可以使用少量体积多次洗脱，这样头几次的收集物浓度较高，或许够你使用。
3.如果还不行，或许就是你纯化的蛋白不够纯，增加洗涤液的盐离子或去污剂的浓度吧。

祝好！
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2楼2014-02-20 10:30:35
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pengyun2521

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
爱的天使13: 金币+2, ★有帮助 2014-02-20 20:08:32
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:53
这种情况有遇到过，应该是蛋白性质易受离心力的影响，可以降低转速浓缩看一下。
如果浓缩蛋白用于晶体生长，影响不大，有的时候是时间久了蛋白以聚集体的形式存在，只要还是原来蛋白，就可以用，没有降解就好。
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不积跬步无以至千里！
3楼2014-02-20 18:53:24
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朱小坏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
爱的天使13: 金币+2, ★有帮助 2014-02-20 20:08:42
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:56
我最近也遇到了这个问题，在溶解液的时候还是1条带的，后来复性多了1条带，就是在目的条带下面紧接着会有一条带，大概相差2KD左右，有时上面浓一点，有时下面浓一点，还不知道啥原因。有看到文献里纯化蛋白的到最后也出现了2条带，正在寻找原因中，可以和楼组多多交流。不知道是不是和蛋白的结构有关系？像质粒一样存在多种状态
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4楼2014-02-20 19:29:58
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爱的天使13

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-02-20 10:30:35
建议：
1.彻底清洗使用的浓缩管。可能是前一次使用留下的杂质
2.如果不行，可以使用少量体积多次洗脱，这样头几次的收集物浓度较高，或许够你使用。
3.如果还不行，或许就是你纯化的蛋白不够纯，增加洗涤液的盐离 ...

浓缩前也是出现了两条带啊，所以浓缩管没问题。建议2、3没明白啥意思，
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5楼2014-02-20 20:04:53
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爱的天使13

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pengyun2521 at 2014-02-20 18:53:24
这种情况有遇到过，应该是蛋白性质易受离心力的影响，可以降低转速浓缩看一下。
如果浓缩蛋白用于晶体生长，影响不大，有的时候是时间久了蛋白以聚集体的形式存在，只要还是原来蛋白，就可以用，没有降解就好。

恩恩，降一下浓度试试。我的蛋白可能也有降解，有办法吗
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6楼2014-02-20 20:06:40
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爱的天使13

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱小坏 at 2014-02-20 19:29:58
我最近也遇到了这个问题，在溶解液的时候还是1条带的，后来复性多了1条带，就是在目的条带下面紧接着会有一条带，大概相差2KD左右，有时上面浓一点，有时下面浓一点，还不知道啥原因。有看到文献里纯化蛋白的到最后 ...

麻烦的一个蛋白
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7楼2014-02-20 20:07:39
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xuexue1992

新虫 (初入文坛)
降解了吧，我一用超滤管就降解，主带变弱，下面那条带变亮
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8楼2018-01-03 10:15:29
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