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爱的天使13

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓缩后出问题了,急求助

浓缩后目的条带那里出现了两条带,各位大神有没有遇到过此情况,怎么解决的
蛋白浓缩后出问题了,急求助
20140213 DEAE 蛋白大小余额48kDa .jpg


蛋白浓缩后出问题了,急求助-1
20140214 浓缩前后(第一条浓缩后,第二条浓缩前).jpg
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
爱的天使13: 金币+2, 有帮助 2014-02-20 20:08:22
爱的天使13(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:50
建议:
1.彻底清洗使用的浓缩管。可能是前一次使用留下的杂质
2.如果不行,可以使用少量体积多次洗脱,这样头几次的收集物浓度较高,或许够你使用。
3.如果还不行,或许就是你纯化的蛋白不够纯,增加洗涤液的盐离子或去污剂的浓度吧。

祝好!
2楼2014-02-20 10:30:35
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pengyun2521

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
爱的天使13: 金币+2, 有帮助 2014-02-20 20:08:32
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:53
这种情况有遇到过,应该是蛋白性质易受离心力的影响,可以降低转速浓缩看一下。
如果浓缩蛋白用于晶体生长,影响不大,有的时候是时间久了蛋白以聚集体的形式存在,只要还是原来蛋白,就可以用,没有降解就好。
不积跬步无以至千里!
3楼2014-02-20 18:53:24
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朱小坏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
爱的天使13: 金币+2, 有帮助 2014-02-20 20:08:42
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:56
我最近也遇到了这个问题,在溶解液的时候还是1条带的,后来复性多了1条带,就是在目的条带下面紧接着会有一条带,大概相差2KD左右,有时上面浓一点,有时下面浓一点,还不知道啥原因。有看到文献里纯化蛋白的到最后也出现了2条带,正在寻找原因中,可以和楼组多多交流。不知道是不是和蛋白的结构有关系?像质粒一样存在多种状态
4楼2014-02-20 19:29:58
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爱的天使13

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-02-20 10:30:35
建议:
1.彻底清洗使用的浓缩管。可能是前一次使用留下的杂质
2.如果不行,可以使用少量体积多次洗脱,这样头几次的收集物浓度较高,或许够你使用。
3.如果还不行,或许就是你纯化的蛋白不够纯,增加洗涤液的盐离 ...

浓缩前也是出现了两条带啊,所以浓缩管没问题。建议2、3没明白啥意思,
5楼2014-02-20 20:04:53
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爱的天使13

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by pengyun2521 at 2014-02-20 18:53:24
这种情况有遇到过,应该是蛋白性质易受离心力的影响,可以降低转速浓缩看一下。
如果浓缩蛋白用于晶体生长,影响不大,有的时候是时间久了蛋白以聚集体的形式存在,只要还是原来蛋白,就可以用,没有降解就好。

恩恩,降一下浓度试试。我的蛋白可能也有降解,有办法吗
6楼2014-02-20 20:06:40
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爱的天使13

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱小坏 at 2014-02-20 19:29:58
我最近也遇到了这个问题,在溶解液的时候还是1条带的,后来复性多了1条带,就是在目的条带下面紧接着会有一条带,大概相差2KD左右,有时上面浓一点,有时下面浓一点,还不知道啥原因。有看到文献里纯化蛋白的到最后 ...

麻烦的一个蛋白
7楼2014-02-20 20:07:39
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xuexue1992

新虫 (初入文坛)

降解了吧,我一用超滤管就降解,主带变弱,下面那条带变亮
8楼2018-01-03 10:15:29
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