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1楼2014-02-20 09:27:03

shiyiyaya

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爱的天使13(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:50

建议：
1.彻底清洗使用的浓缩管。可能是前一次使用留下的杂质
2.如果不行，可以使用少量体积多次洗脱，这样头几次的收集物浓度较高，或许够你使用。
3.如果还不行，或许就是你纯化的蛋白不够纯，增加洗涤液的盐离子或去污剂的浓度吧。

祝好！

2楼2014-02-20 10:30:35

pengyun2521

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-21 09:58:53

这种情况有遇到过，应该是蛋白性质易受离心力的影响，可以降低转速浓缩看一下。
如果浓缩蛋白用于晶体生长，影响不大，有的时候是时间久了蛋白以聚集体的形式存在，只要还是原来蛋白，就可以用，没有降解就好。

不积跬步无以至千里！

3楼2014-02-20 18:53:24

朱小坏

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我最近也遇到了这个问题，在溶解液的时候还是1条带的，后来复性多了1条带，就是在目的条带下面紧接着会有一条带，大概相差2KD左右，有时上面浓一点，有时下面浓一点，还不知道啥原因。有看到文献里纯化蛋白的到最后也出现了2条带，正在寻找原因中，可以和楼组多多交流。不知道是不是和蛋白的结构有关系？像质粒一样存在多种状态

4楼2014-02-20 19:29:58

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2楼: Originally posted by shiyiyaya at 2014-02-20 10:30:35
建议：
1.彻底清洗使用的浓缩管。可能是前一次使用留下的杂质
2.如果不行，可以使用少量体积多次洗脱，这样头几次的收集物浓度较高，或许够你使用。
3.如果还不行，或许就是你纯化的蛋白不够纯，增加洗涤液的盐离 ...

浓缩前也是出现了两条带啊，所以浓缩管没问题。建议2、3没明白啥意思，

5楼2014-02-20 20:04:53

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3楼: Originally posted by pengyun2521 at 2014-02-20 18:53:24
这种情况有遇到过，应该是蛋白性质易受离心力的影响，可以降低转速浓缩看一下。
如果浓缩蛋白用于晶体生长，影响不大，有的时候是时间久了蛋白以聚集体的形式存在，只要还是原来蛋白，就可以用，没有降解就好。

恩恩，降一下浓度试试。我的蛋白可能也有降解，有办法吗

6楼2014-02-20 20:06:40

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4楼: Originally posted by 朱小坏 at 2014-02-20 19:29:58
我最近也遇到了这个问题，在溶解液的时候还是1条带的，后来复性多了1条带，就是在目的条带下面紧接着会有一条带，大概相差2KD左右，有时上面浓一点，有时下面浓一点，还不知道啥原因。有看到文献里纯化蛋白的到最后 ...

麻烦的一个蛋白

7楼2014-02-20 20:07:39

xuexue1992

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降解了吧，我一用超滤管就降解，主带变弱，下面那条带变亮

8楼2018-01-03 10:15:29