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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质浓缩问题-MWCO
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lishaohe

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质浓缩问题-MWCO

请问大家一个问题，我重组表达的蛋白质大小为35KD左右（SDS-PAGE），细胞破碎后离心后，用100KD MWCO滤膜进行截留（通过离心管离心完成），但是为什么我的目标蛋白却在滤膜上上清液中，离心下来的液体中没有目的蛋白。
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1楼2013-08-21 21:29:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lishaohe(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 20:06:47
目标蛋白可能形成多聚体。在SDS-PAGE中加了还原剂和变性剂，已经是单体亚基状态了，所以比较小。
话说回来了，你浓缩蛋白应该用截留分子量比目标蛋白小的膜，使蛋白截留在膜上面吧。
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5楼2013-08-21 23:54:36
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lishaohe

新虫 (小有名气)
没人能够回答吗？
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3楼2013-08-21 21:45:09
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
lishaohe(金币+1): 谢谢参与
目的蛋白35k，截留量100k，离心后就透过滤膜了吧？被上清和液体搞混了，楼主的目的就是为了蛋白穿透？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-08-21 22:23:51
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fuyuandj86

版主 (著名写手)
★ ★ ★
lishaohe(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 20:06:56
唔,楼上说的对,浓缩蛋白应该用MWCO比目的蛋白小的,很少见有这么逆着用的
不过我以前倒是也这么做过,如果目的蛋白比MWCO小,也会被一定程度的富集,滤膜上清有50%穿透的有50%的样子,分离效果不好.需要再将滤膜上清稀释,然后再离心,反复好几次.
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6楼2013-08-22 00:47:00
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929519755

金虫 (正式写手)
★
lishaohe(金币+1): 谢谢参与
你超滤多长时间？？
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7楼2013-08-22 10:01:44
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忘性大啊

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
变性剂会影响超滤效果，蛋白浓度高的话会有截留作用。一般滤不下来。
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8楼2013-08-22 10:32:08
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dutongde

新虫 (初入文坛)
哈哈好
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9楼2013-08-22 10:35:42
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2008101111

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个现象很不正常，最大可能是形成了聚合体蛋白
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10楼2013-08-23 11:05:57
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lishaohe

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 929519755 at 2013-08-22 10:01:44
你超滤多长时间？？

就是离心5分钟。
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11楼2013-08-25 12:36:03
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yingying15882楼
2013-08-21 21:44   回复  
lishaohe(金币+1): 谢谢参与
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