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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 有关浓缩质粒的问题
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关浓缩质粒的问题 已有5人参与

我前几天收到别的学校的老师给寄的质粒，是滴在滤纸上的那种。我把它剪碎之后，用75微升的双蒸水洗脱下来。昨天做的转化，可是一个平板上才长了两个菌落，所以，我想把它浓缩一下。
    可不可以把这75微升的质粒溶液滴在提质粒用的柱子上，然后吹干，再用20微升的水洗脱啊，这样做，质粒的损失会不会很大？
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1楼 2014-03-23 09:21:18
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-24 13:35:32
seven拂晓: 金币+1 2014-03-24 19:58:06
两个菌是阳性就可以了，你要过柱子的话估计再转两个菌都不一定长。你溶解在离心管里的质粒很少，越纯化越少。
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hehe
7楼2014-03-24 08:07:03
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-23 11:50:32
seven拂晓: 金币+1 2014-03-23 23:51:53
这样做的话，损失会很大，如果你可以找到一个speed-vac的东西，旋转然后蒸发。

或者你可以用乙醇沉淀的方法。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-03-23 10:56:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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seven拂晓: 金币+4 2014-03-24 19:59:57
长两个菌落，已经足够你用了啊，你把那两个菌落培养上，然后抽质粒看看是不是你想要的，如果是了，就OK了，如果不是，再重新转化，用效率高些的感受态来做转化
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-03-23 14:37:09
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+1 2014-03-23 23:51:34
seven拂晓: 金币+2 2014-03-24 19:59:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:53:46
两个克隆都有一个是对的就够了。

如果要浓缩的话，不需要柱子，只需要放在37摄氏度烘箱，放上一会儿，水分就蒸发了，短时间的温育不影响质粒的。
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4楼2014-03-23 20:44:36
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