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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 毕赤酵母表达后的蛋白浓缩
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ft3049527

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达后的蛋白浓缩 已有2人参与

用的是pPICZ载体，转的是GS115菌株。每天取了10ml菌液。现在准备跑SDS-PAGE验证蛋白表达。因为是10ml菌液，准备离心之后取上清再用TCA浓缩。希望有人能给一个合适的TCA浓缩的Protocol.谢谢。
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1楼 2014-03-18 16:20:29
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lpzl

木虫 (正式写手)
同求同求。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-03-18 17:01:58
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Allen206

银虫 (小有名气)
请问你表达的蛋白不用脱除色素么？会不会是黄色的？
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不想说什么，，，，
3楼2014-03-18 17:24:21
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ft3049527

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Allen206 at 2014-03-18 17:24:21
请问你表达的蛋白不用脱除色素么？会不会是黄色的？

没有脱色素，用TCA沉淀之后是棕黑色的。黄色的？每太明白...
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4楼2014-03-20 17:09:21
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zhang宇微

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1毫升上清液加100微升TCA,4度放置一小时，离心，沉淀用0.1摩尔氢氧化钠重悬
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5楼2014-03-27 17:12:45
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huantianxi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没有必要要取10ml菌液，取个600ul足够了 ，上样上个60ul足够了，如果这样你还看不到条带的话，说明你的目的蛋白没有表达，或者是太低了，做出来也没有什么大用处，我一般上个60ul能看的很清楚。没有必要浓缩，要是浓缩的话，也没有必要那么麻烦，用透析袋就行了，外面加点PEG
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6楼2014-04-21 18:37:26
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