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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助real time PCR内参基因及其引物
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wendywan

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 求助real time PCR内参基因及其引物 已有1人参与

求助各位高手：
1 前因：现做mouse brain发育谱，测试相关的基因在mRNA 水平上的表达，一直找不到合适的内参基因。试过GAPDH, TBP,RP123，tubulin，actin。。。目的基因变化没相差十倍以上，故这些内参基因均不合适。因组内有人用相同的组织做WB,结果显示的 GAPDH表达是随时间上升的，tubulin和histone是平的。TBP是下降的。因此在目的基因表达量不是太高的情况的，用这些内参基因是没法看出其变化水平的。

2 后果：现在要检测的基因完全不知是如何变化的。试验无法继续。。。。当然组化时没办法做了，因没好的抗体。原位杂交老板觉得不靠谱。

3 求助：求推荐好的内参基因，不随发育而改变的。另外求助下：H4 mouse的real time PCR 引物啊。。。太多cluster了，真的不知道如何是好。。。。

谢谢了。。。
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每天都应该做点有意义的事情！
1楼 2014-03-04 16:05:34
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wendywan(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-04 18:59:18
有没有试过β-actin，18s-rRNA
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天行健
2楼2014-03-04 17:51:24
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wendywan

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-03-04 17:51:24
有没有试过β-actin，18s-rRNA

没了，感觉做发育谱，beta-actin有点不靠谱，组内wb看到的是随时间是上升的，跟骨架相关的都有点不太好。做过beta-tubulin的，结果还没GAPDH好，相差倍数太大了。
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每天都应该做点有意义的事情！
3楼2014-03-05 09:30:20
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