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wendywan

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 求助real time PCR内参基因及其引物 已有1人参与

求助各位高手:
1 前因:现做mouse brain发育谱,测试相关的基因在mRNA 水平上的表达,一直找不到合适的内参基因。试过GAPDH, TBP,RP123,tubulin,actin。。。目的基因变化没相差十倍以上,故这些内参基因均不合适。因组内有人用相同的组织做WB,结果显示的 GAPDH表达是随时间上升的,tubulin和histone是平的。TBP是下降的。因此在目的基因表达量不是太高的情况的,用这些内参基因是没法看出其变化水平的。

2 后果:现在要检测的基因完全不知是如何变化的。试验无法继续。。。。当然组化时没办法做了,因没好的抗体。原位杂交老板觉得不靠谱。

3 求助:求推荐好的内参基因,不随发育而改变的。另外求助下:H4 mouse的real time PCR 引物啊。。。太多cluster了,真的不知道如何是好。。。。

谢谢了。。。
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youlinglyw

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wendywan(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-04 18:59:18
有没有试过β-actin,18s-rRNA
天行健
2楼2014-03-04 17:51:24
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wendywan

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-03-04 17:51:24
有没有试过β-actin,18s-rRNA

没了,感觉做发育谱,beta-actin有点不靠谱,组内wb看到的是随时间是上升的,跟骨架相关的都有点不太好。做过beta-tubulin的,结果还没GAPDH好,相差倍数太大了。
每天都应该做点有意义的事情!
3楼2014-03-05 09:30:20
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