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飘逸的云

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母破胞问题求助 已有4人参与

本人刚开始做酿酒酵母,需要破壁得到胞内的蛋白,但是实验室以前没人做过,所以不知道要怎么操作,请问有前辈能否提供一些指导吗?我试过用超声破碎的方法,功率大概为600w左右,破碎之后离心看到了沉淀中有黑色的物质生成了,但是不知道破碎效率怎么样,想请教一下有没有人试过用超声破碎酵母细胞的,非常感谢!其他方法,如酸洗玻璃珠法中的玻璃珠能够重复利用吗?
跪谢各位大侠指点!
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
出现黑色,那一般是你的酵母进入了衰亡期,做这种实验最好在对数期进行。
我不会!
9楼2014-02-24 19:14:13
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查看全部 22 个回答

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飘逸的云: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-02-23 23:45:19
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-02-23 23:52:22
木有问题的,如果酵母表达的蛋白不需要活性检测什么的,600W木有问题的。如果需要后续的活性检测,建议功率适当降低 400w可以了。超声后离心有黑色物质也很正常,不用担心。至于超声的时间,看你超声的菌液量。一般20-30分钟就可以了。
3楼2014-02-23 18:59:34
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-23 18:59:34
木有问题的,如果酵母表达的蛋白不需要活性检测什么的,600W木有问题的。如果需要后续的活性检测,建议功率适当降低 400w可以了。超声后离心有黑色物质也很正常,不用担心。至于超声的时间,看你超声的菌液量。一般 ...

再请问一下破胞的时候需要加什么特定的缓冲液吗?怎么样来看破碎效率?400破能破开吗?谢谢!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-02-23 23:48:02
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-02-23 23:48:02
再请问一下破胞的时候需要加什么特定的缓冲液吗?怎么样来看破碎效率?400破能破开吗?谢谢!
...

我们破碎细胞的时候都是加PBS缓冲液的。具体的破碎效率我还真不知道哎,当破碎效果比较好的时候你会发现菌液变得比较澄清。我们400W木有问题的,也有可能具体型号不同略有不同吧,这个需要你自己调试。
5楼2014-02-24 14:40:42
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