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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母菌破壁
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】酵母菌破壁 已有11人参与

这几天在破酵母菌的细胞壁，想从里面提取蛋白，一直不理想，染色发现没有条带，恳请热心的虫友指点！感激不尽
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1楼 2010-08-01 19:28:04
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的破壁  过程 具体如如何
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-08-01 19:30:44
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)
用了超声破菌，超5s.停5s，总共超了3个小时，跑page后没有条带；还用了异丙醇溶解，头一回溶了8个小时左右，跑page只出现了2条带，这次用异丙醇溶了2小时，跑page后没有条带，好郁闷哦!煮沸，冷冻重复3次也没有蛋白条带。
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3楼2010-08-02 14:47:34
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henkally

禁虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-02 17:10:36
本帖内容被屏蔽
4楼2010-08-02 15:10:37
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):鼓励交流 2010-08-02 17:30:35
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2010-08-02 15:10:37:
建议用玻璃珠破碎法(玻璃珠SIGMA有卖,具体步骤百度一下就知道了).
酵母细胞壁很厚,超声破碎效果很差的.我们实验室一直都用玻璃珠

恩，很多文献都是用的玻璃珠破壁，但是破壁的时候要保持低温，因为玻璃珠很热，会导师蛋白降解，可惜我们实验室都是用涡旋仪涡旋的，每次在那里破壁都要用很久的时间，请问你们是用什么涡旋的呢？
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5楼2010-08-02 16:34:27
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看天

木虫 (知名作家)
★
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引用回帖:
Originally posted by 幸运随我99 at 2010-08-02 14:47:34:
用了超声破菌，超5s.停5s，总共超了3个小时，跑page后没有条带；还用了异丙醇溶解，头一回溶了8个小时左右，跑page只出现了2条带，这次用异丙醇溶了2小时，跑page后没有条带，好郁闷哦!煮沸，冷冻重复3次也没有蛋 ...

3个小时！！！我们以前才12min....那我们的岂不是一点用没有了？
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
6楼2010-08-02 17:31:13
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-08-02 16:34:27:

恩，很多文献都是用的玻璃珠破壁，但是破壁的时候要保持低温，因为玻璃珠很热，会导师蛋白降解，可惜我们实验室都是用涡旋仪涡旋的，每次在那里破壁都要用很久的时间，请问你们是用什么涡旋的呢？

玻璃珠太贵了，想的是如果有更实惠的方法的话，就可以经济些。看来只得买玻璃珠了哦。
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7楼2010-08-02 18:04:48
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dcb005

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):能不能具体点 2010-08-02 21:17:32
0.2% NaOH
是我看到的一篇英文文献介绍的，文章已经记不清了。大致说SDS-PAGE的处理方法，用NaOH 室温处理5min 之后在用5倍loading buffer 混合95变性
蛋白就出来了
我感觉应该也适用于提蛋白

[ Last edited by dcb005 on 2010-8-2 at 21:22 ]
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
8楼2010-08-02 21:10:56
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 幸运随我99 at 2010-08-02 18:04:48:

玻璃珠太贵了，想的是如果有更实惠的方法的话，就可以经济些。看来只得买玻璃珠了哦。

是有点贵，不过可以重复使用，在文献上看到用浓硝酸泡一个小时，在用水清洗之后就可以用了，不过还没实践过
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9楼2010-08-03 09:52:14
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:10:56:
0.2% NaOH
是我看到的一篇英文文献介绍的，文章已经记不清了。大致说SDS-PAGE的处理方法，用NaOH 室温处理5min 之后在用5倍loading buffer 混合95变性
蛋白就出来了
我感觉应该也适用于提蛋白

[ Last edit ...

谢谢你，呵呵，反正养菌也不麻烦，试试你提供的方法，感激！
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10楼2010-08-03 13:55:09
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