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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】酵母菌破壁已有11人参与

这几天在破酵母菌的细胞壁,想从里面提取蛋白,一直不理想,染色发现没有条带,恳请热心的虫友指点!感激不尽
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)

用了超声破菌,超5s.停5s,总共超了3个小时,跑page后没有条带;还用了异丙醇溶解,头一回溶了8个小时左右,跑page只出现了2条带,这次用异丙醇溶了2小时,跑page后没有条带,好郁闷哦!煮沸,冷冻重复3次也没有蛋白条带。
3楼2010-08-02 14:47:34
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-08-02 16:34:27:

恩,很多文献都是用的玻璃珠破壁,但是破壁的时候要保持低温,因为玻璃珠很热,会导师蛋白降解,可惜我们实验室都是用涡旋仪涡旋的,每次在那里破壁都要用很久的时间,请问你们是用什么涡旋的呢?

玻璃珠太贵了,想的是如果有更实惠的方法的话,就可以经济些。看来只得买玻璃珠了哦。
7楼2010-08-02 18:04:48
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:10:56:
0.2% NaOH
是我看到的一篇英文文献介绍的,文章已经记不清了。大致说SDS-PAGE的处理方法,用NaOH 室温处理5min 之后在用5倍loading buffer 混合95变性
蛋白就出来了
我感觉应该也适用于提蛋白

[ Last edit ...

谢谢你,呵呵,反正养菌也不麻烦,试试你提供的方法,感激!
10楼2010-08-03 13:55:09
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幸运随我99

铜虫 (初入文坛)

谢谢各位虫友 嘿嘿
12楼2010-08-10 15:39:50
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