| 查看: 2169 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
连接时载体去磷 已有3人参与
|
|||
|
载体和目的片段链接的时候，因为载体自连，阳性很少，所以用碱性磷酸酶处理载体去磷，再和目的片段连接，以提高连接效率。 我想问一下，去磷的反应条件是什么，然后怎么把载体上的磷酸酶去掉终止反应，80度反应20分钟会不会让DNA双链开环，还有没有其他方法？连接时目的片段怎么处理？PCR回收后就可以用T4连接酶连了吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有135人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有5人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 单酶切后的载体和目的片段是否都需要去磷酸化
已经有4人回复
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体
已经有13人回复
- 目的基因与载体连接问题
已经有8人回复
- 载体去磷酸化后大小变大
已经有3人回复
- T载体连接不上去
已经有26人回复
- 30bp的DNA片段与3.5kb的载体连接
已经有10人回复
- 确定连接时载体，片段的加入量
已经有4人回复
- 关于基因重组过程中的去磷酸化和连接
已经有4人回复
- T载体连接温度和时间
已经有7人回复
- 求助：Xho 1 单酶切 载体连接
已经有19人回复
- T载体连接问题
已经有3人回复
- 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
已经有5人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于T载体连接问题
已经有22人回复
- 【求助/交流】载体酶切和连接
已经有12人回复
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-20 00:05:09
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-20 00:05:09
|
一般来说，载体去磷酸化不好掌握。如果不用尽量不用。 http://www.51atgc.com/shiyanjish ... 0-01-17/1226_2.html |
3楼2014-02-19 17:28:15
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2014-02-19 17:27:42
shiyiyaya
金虫 (正式写手)
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 1276.4
- 散金: 279
- 红花: 8
- 帖子: 301
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 871992
- 注册: 2009-10-14
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-20 00:04:32
zhang宇微: 金币+3 2014-03-06 20:08:43
zhang宇微: 金币+3, ★有帮助 2014-04-24 13:31:40
zhang宇微: 金币+3, ★有帮助 2014-04-28 16:31:21
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-20 00:04:32
zhang宇微: 金币+3 2014-03-06 20:08:43
zhang宇微: 金币+3, ★有帮助 2014-04-24 13:31:40
zhang宇微: 金币+3, ★有帮助 2014-04-28 16:31:21
|
我们去磷的时候用SAP，小牛磷酸酶等，他们都有对应的buffer，也是按照说明书做的。灭活的时候65°C即可，20min。 直接胶回收，回收柱的那种简单回收，去掉盐离子就行。后续连接正常。 祝顺利！ |
4楼2014-02-19 17:45:39
zhang宇微5楼2014-02-19 20:13:59
20