| 查看: 2076 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
皇猪木虫 (正式写手)
|
[求助]
基因克隆流程 已有1人参与
|
|
|
春节来了，本人给大家先拜个年，祝大家马年马上有车，马上有房，马上有对象，马上有金山。。。。。。 各位学者， 本人最近需要对100bp左右的PCR扩增产物测序，按照测序公司的要求，做了基因克隆，第一次做克隆吧，测序出来的结果显示 序列有920bp，远大于我的目的片段，而且测出的序列也不是我需要的，因年底从实验室回家了，这个问题还没有进行多深的探讨，想在小木虫 论坛上咨询咨询做过克隆测序的前辈，为了实现测序目的该怎么做基因克隆，具体流程怎样？？？？ 再次向大家拜年，祝大家新年快乐，阖家欢乐！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有284人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我想做两个基因的融合克隆表达，怎么设计引物使两个基因融合啊？
已经有4人回复
- 急急急，如何设计一个已知基因的引物，克隆基因使原核表达，怒送金币
已经有11人回复
- 克隆某一功能基因的全长，要不要做Race？
已经有7人回复
- 求助基因表达过程清晰图片一张
已经有9人回复
- 做共表达，用什么克隆方法比较好呢？
已经有14人回复
- 推荐关于基因克隆、表达分析的审稿快的中文核心期刊
已经有7人回复
- 克隆基因选取 菜鸟！！
已经有9人回复
- 克隆基因，挑克隆拿去测序，好多点突怎么办！？
已经有21人回复
- 我有几个克隆和基因重组的基本问题不太清楚，请各位帮帮忙！
已经有6人回复
- 有关基因克隆，蛋白表达和纯化的原理及操作步骤
已经有4人回复
- 真菌的基因克隆与表达 为什么要去除内含子？
已经有5人回复
- 请教各位高人，基因克隆表达的流程是什么？
已经有8人回复
- 克隆过程出现的问题
已经有7人回复
- 求助基因克隆视频
已经有11人回复
- 【资料】基因克隆详细步骤说明
已经有449人回复
- 基因克隆问题~~
已经有5人回复
- 【求助/交流】基因做表达实验必须要克隆全长吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】真菌的基因克隆与表达
已经有7人回复
4楼2014-01-31 00:59:09
Lau_Kimura
铁虫 (正式写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 20.5
- 散金: 189
- 红花: 19
- 帖子: 320
- 在线: 119.1小时
- 虫号: 2468570
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2014-01-30 08:03:17
皇猪: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-01 22:43:12
皇猪: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-02 13:21:04
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2014-01-30 08:03:17
皇猪: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-01 22:43:12
皇猪: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-02 13:21:04
|
最简单的TA克隆（Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A） Taq酶PCR，电泳检测产物特异性（如有必要，切胶回收），异丙醇沉淀纯化； 连接：Takara 的 pMD 18-T Vector试剂盒； 电击转化：取1-1.5微升重组质粒，40微升分装的E.coli感受态，1100V，200欧姆（1mm电击杯）； 涂板：2倍YT培养基（1mL）复苏30min后，取100微升涂布抗性筛选平板； 摇菌：挑取单菌落加入抗性LB培养基中，摇菌过夜； PCR检测：粗提质粒（200微升沉淀，加50微升水重悬浮，95度7分钟裂解，离心取2微升上清做模版）。 提质粒，消化RNA，送测序即可。 |
2楼2014-01-29 23:32:55
bujunyang
木虫 (正式写手)
卓尔不群
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2600.8
- 散金: 299
- 红花: 4
- 帖子: 829
- 在线: 206.2小时
- 虫号: 808463
- 注册: 2009-07-13
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2014-01-30 08:03:22
皇猪: 金币+3 2014-02-01 22:43:16
皇猪: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-02 13:20:28
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2014-01-30 08:03:22
皇猪: 金币+3 2014-02-01 22:43:16
皇猪: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-02 13:20:28
| 建议你还是先了解一下测序原理。一个测序反应一般可以测800到1000bp。测序的结果，前边的几十个碱基和最后的几十个碱基是测不准确的，所以测序公司会建议把DNA片段连接到一个载体上去，测序反应从载体开始，这样就可以保证你的序列不会落到最前面的几十个碱基中。你需要做的是做连接和转化，挑选正确的克隆送去测序，然后从返回的结果中找到你的序列。 |
3楼2014-01-30 00:16:21
5楼2014-02-02 08:21:43
