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皇猪

木虫 (正式写手)

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[求助] 基因克隆流程已有1人参与

春节来了，本人给大家先拜个年，祝大家马年马上有车，马上有房，马上有对象，马上有金山。。。。。。

各位学者，

      本人最近需要对100bp左右的PCR扩增产物测序，按照测序公司的要求，做了基因克隆，第一次做克隆吧，测序出来的结果显示
序列有920bp，远大于我的目的片段，而且测出的序列也不是我需要的，因年底从实验室回家了，这个问题还没有进行多深的探讨，想在小木虫
论坛上咨询咨询做过克隆测序的前辈，为了实现测序目的该怎么做基因克隆，具体流程怎样？？？？

   再次向大家拜年，祝大家新年快乐，阖家欢乐！！！

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没有梦想，那跟咸鱼有什么分别

1楼 2014-01-29 21:14:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bujunyang

木虫 (正式写手)

卓尔不群

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2014-01-30 08:03:22
皇猪: 金币+3 2014-02-01 22:43:16
皇猪: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-02 13:20:28

建议你还是先了解一下测序原理。一个测序反应一般可以测800到1000bp。测序的结果，前边的几十个碱基和最后的几十个碱基是测不准确的，所以测序公司会建议把DNA片段连接到一个载体上去，测序反应从载体开始，这样就可以保证你的序列不会落到最前面的几十个碱基中。你需要做的是做连接和转化，挑选正确的克隆送去测序，然后从返回的结果中找到你的序列。

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来是偶然，去是必然。

3楼2014-01-30 00:16:21