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三蛰

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[求助] 一个关于酶切后质粒载体构建的问题已有3人参与

最近在将一个两段带有酶切位点（如a，b）的目的片段通过双酶切后，连接到同样双酶切（a，b）的质粒载体的多克隆位点上。问题在于，每次目的片段的浓度很大，但酶切时体系中用的量很少，比如20ul只用2ul，导致最终酶切成功后无法纯化出浓度适合下一步连接实验的产物，请各位指导一下。解决办法是同比例放大酶切体系？还是什么别的方法？谢谢！

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我不会！

1楼 2014-01-20 18:59:06

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三蛰

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-01-20 21:16:29
ab酶可同时用的话，载体、片段都回收以后，可以都切2ug,再直接加1.5V体积的DE-B过柱回收，估量，连接。
ab不能同时用，可以切3ug，酶要一个一个切。然后过柱回收，估量，连接。

连接时按那个公式计算加多少体积 ...

好像目的片段最好上50ng才中……好吧，就这样吧。没有捷径就脚踏实地，吼吼

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