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shanda007

新虫 (初入文坛)

[求助] pcold-TF表达重组蛋白 已有1人参与

我利用pcold-TF质粒表达出了重组蛋白,带HIS标签的,并且利用NI柱纯化出了蛋白,但是用HIS单抗做WESTERN并没有做出来。
有点搞不懂了,用HIS标签纯化出了蛋白,为什么用HIS单抗做不出来呢?   有大侠知道么?
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by johnsonlike at 2014-02-05 16:09:29
我也用的pCOLD-tf构建表达了蛋白,同样的用HIS单抗做WB 的时候没有条带,但是用自己制备的阳性血清就能识别,只要阳性血清能识别,就是可以用的,我想问一下,你用tf表达的蛋白,纯化以后,能纯化很干净吗?我一直纯 ...

我现在是用这个载体cold TF,你的诱导条件是什么呀,OD值多少?我现在诱导一直诱导不出来,都不知道什么原因,前肽诱导出来了,成熟肽诱导不出来。
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
4楼2015-05-28 09:41:09
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yang0071

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你有做阳性对照吗?
2楼2014-01-16 08:11:42
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johnsonlike

新虫 (初入文坛)

我也用的pCOLD-tf构建表达了蛋白,同样的用HIS单抗做WB 的时候没有条带,但是用自己制备的阳性血清就能识别,只要阳性血清能识别,就是可以用的,我想问一下,你用tf表达的蛋白,纯化以后,能纯化很干净吗?我一直纯化不干净
3楼2014-02-05 16:09:29
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pjxiongjing

新虫 (小有名气)

你好,请问你用的是什么诱导条件

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-06-09 19:07:31
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