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shanda007

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[求助] pcold-TF表达重组蛋白已有1人参与

我利用pcold-TF质粒表达出了重组蛋白，带HIS标签的，并且利用NI柱纯化出了蛋白，但是用HIS单抗做WESTERN并没有做出来。
有点搞不懂了，用HIS标签纯化出了蛋白，为什么用HIS单抗做不出来呢? 有大侠知道么？

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1楼 2014-01-16 02:47:20

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yang0071

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你有做阳性对照吗？

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2楼2014-01-16 08:11:42

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johnsonlike

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我也用的pCOLD-tf构建表达了蛋白，同样的用HIS单抗做WB 的时候没有条带，但是用自己制备的阳性血清就能识别，只要阳性血清能识别，就是可以用的，我想问一下，你用tf表达的蛋白，纯化以后，能纯化很干净吗？我一直纯化不干净

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3楼2014-02-05 16:09:29

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wuwenmei

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引用回帖:

3楼: Originally posted by johnsonlike at 2014-02-05 16:09:29
我也用的pCOLD-tf构建表达了蛋白，同样的用HIS单抗做WB 的时候没有条带，但是用自己制备的阳性血清就能识别，只要阳性血清能识别，就是可以用的，我想问一下，你用tf表达的蛋白，纯化以后，能纯化很干净吗？我一直纯 ...

我现在是用这个载体cold TF，你的诱导条件是什么呀，OD值多少？我现在诱导一直诱导不出来，都不知道什么原因，前肽诱导出来了，成熟肽诱导不出来。

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