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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcold-TF表达重组蛋白
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shanda007

新虫 (初入文坛)

[求助] pcold-TF表达重组蛋白 已有1人参与

我利用pcold-TF质粒表达出了重组蛋白，带HIS标签的，并且利用NI柱纯化出了蛋白，但是用HIS单抗做WESTERN并没有做出来。
有点搞不懂了，用HIS标签纯化出了蛋白，为什么用HIS单抗做不出来呢?   有大侠知道么？
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1楼 2014-01-16 02:47:20
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你有做阳性对照吗？
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2楼2014-01-16 08:11:42
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johnsonlike

新虫 (初入文坛)
我也用的pCOLD-tf构建表达了蛋白，同样的用HIS单抗做WB 的时候没有条带，但是用自己制备的阳性血清就能识别，只要阳性血清能识别，就是可以用的，我想问一下，你用tf表达的蛋白，纯化以后，能纯化很干净吗？我一直纯化不干净
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3楼2014-02-05 16:09:29
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by johnsonlike at 2014-02-05 16:09:29
我也用的pCOLD-tf构建表达了蛋白，同样的用HIS单抗做WB 的时候没有条带，但是用自己制备的阳性血清就能识别，只要阳性血清能识别，就是可以用的，我想问一下，你用tf表达的蛋白，纯化以后，能纯化很干净吗？我一直纯 ...

我现在是用这个载体cold TF，你的诱导条件是什么呀，OD值多少？我现在诱导一直诱导不出来，都不知道什么原因，前肽诱导出来了，成熟肽诱导不出来。
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
4楼2015-05-28 09:41:09
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pjxiongjing

新虫 (小有名气)
你好，请问你用的是什么诱导条件

发自小木虫IOS客户端
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5楼2017-06-09 19:07:31
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