应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助半干转膜的问题
51/1返回列表
查看: 2644  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

流传着娃娃

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助半干转膜的问题 已有1人参与

最近在做转膜，本人蛋白50kd左右，用的bio-red半干转膜仪，转膜缓冲液用是39mM甘氨酸，48mM Tris，20%甲醇，ＰＶＤＦ膜，严格按照转膜操作进行的，恒压１２Ｖ的话，电流一开始就过小，只有０.０２Ａ，功率直接显示为零，转膜半小时都转不过去。今天试了恒流转，用了０.０３Ａ的电流，电压慢慢上升快超过２５Ｖ，后来改用０.０２Ａ的电流，电压最大的时候达到２２Ｖ。但是染色还是没有条带。预染marker基本上转过去了。将转过后的胶重新染色，胶上很明显的有我的蛋白。求问为什么半干转电流这么低。。。为什么转不过去。。。都转了N次了，伤心，求助！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-02 15:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流传着娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-04 03:47:25
不同仪器能提供的电流确实不同。主要是不能发热太多，把仪器烧坏。电压增加是正常的，就像跑普通的电泳一样。如果不是升得非常高（如果是太高可能是体系的buffe不够，干掉了）就没事。这么大的蛋白不存在转过的问题 ...

虽然我还是没有做出来，疑似机器出故障了，不过根据你的解释还是对原理更了解了些，谢谢！准备开始湿转。求好运
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-07 15:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
流传着娃娃: 金币+5, ★有帮助 2014-01-07 15:01:15
半干转移的电流本来就很低。与湿法不同，半干转移只有在三明治的地方形成电路，而湿法转移是在整个转移体系里形成电路。我通常用恒流转1小时，转膜电流为三明治的面积（平方厘米）。电压通常是从6V开始，结束时是十几V.
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 04:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流传着娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 04:43:34
半干转移的电流本来就很低。与湿法不同，半干转移只有在三明治的地方形成电路，而湿法转移是在整个转移体系里形成电路。我通常用恒流转1小时，转膜电流为三明治的面积（平方厘米）。电压通常是从6V开始，结束时是十 ...

我也用恒流试过了，按照转膜仪说明书，电流为5.5mA每平方厘米，我没敢用这么大，用了不到1/3的电流，电压一开始就有16V，转不到10分钟就超过25V了。。。惆怅啊。。。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-03 12:12:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 流传着娃娃 at 2014-01-03 12:12:55
我也用恒流试过了，按照转膜仪说明书，电流为5.5mA每平方厘米，我没敢用这么大，用了不到1/3的电流，电压一开始就有16V，转不到10分钟就超过25V了。。。惆怅啊。。。...

不同仪器能提供的电流确实不同。主要是不能发热太多，把仪器烧坏。电压增加是正常的，就像跑普通的电泳一样。如果不是升得非常高（如果是太高可能是体系的buffe不够，干掉了）就没事。这么大的蛋白不存在转过的问题，只要你的仪器允许，转完后没有非常明显的发热就可以的。祝好运。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-04 03:47:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 282求调剂 +3 2103240126 2026-03-02 4/200 2026-03-02 09:25 by 汪！？！
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+3 vida_a 2026-03-01 7/350 2026-03-02 07:51 by ms629
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭