应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助半干转膜的问题
51/1返回列表
查看: 2925  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

流传着娃娃

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助半干转膜的问题 已有1人参与

最近在做转膜，本人蛋白50kd左右，用的bio-red半干转膜仪，转膜缓冲液用是39mM甘氨酸，48mM Tris，20%甲醇，ＰＶＤＦ膜，严格按照转膜操作进行的，恒压１２Ｖ的话，电流一开始就过小，只有０.０２Ａ，功率直接显示为零，转膜半小时都转不过去。今天试了恒流转，用了０.０３Ａ的电流，电压慢慢上升快超过２５Ｖ，后来改用０.０２Ａ的电流，电压最大的时候达到２２Ｖ。但是染色还是没有条带。预染marker基本上转过去了。将转过后的胶重新染色，胶上很明显的有我的蛋白。求问为什么半干转电流这么低。。。为什么转不过去。。。都转了N次了，伤心，求助！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-02 15:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 流传着娃娃 at 2014-01-03 12:12:55
我也用恒流试过了，按照转膜仪说明书，电流为5.5mA每平方厘米，我没敢用这么大，用了不到1/3的电流，电压一开始就有16V，转不到10分钟就超过25V了。。。惆怅啊。。。...

不同仪器能提供的电流确实不同。主要是不能发热太多，把仪器烧坏。电压增加是正常的，就像跑普通的电泳一样。如果不是升得非常高（如果是太高可能是体系的buffe不够，干掉了）就没事。这么大的蛋白不存在转过的问题，只要你的仪器允许，转完后没有非常明显的发热就可以的。祝好运。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-04 03:47:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
流传着娃娃: 金币+5, ★有帮助 2014-01-07 15:01:15
半干转移的电流本来就很低。与湿法不同，半干转移只有在三明治的地方形成电路，而湿法转移是在整个转移体系里形成电路。我通常用恒流转1小时，转膜电流为三明治的面积（平方厘米）。电压通常是从6V开始，结束时是十几V.
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 04:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流传着娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 04:43:34
半干转移的电流本来就很低。与湿法不同，半干转移只有在三明治的地方形成电路，而湿法转移是在整个转移体系里形成电路。我通常用恒流转1小时，转膜电流为三明治的面积（平方厘米）。电压通常是从6V开始，结束时是十 ...

我也用恒流试过了，按照转膜仪说明书，电流为5.5mA每平方厘米，我没敢用这么大，用了不到1/3的电流，电压一开始就有16V，转不到10分钟就超过25V了。。。惆怅啊。。。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-03 12:12:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流传着娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-04 03:47:25
不同仪器能提供的电流确实不同。主要是不能发热太多，把仪器烧坏。电压增加是正常的，就像跑普通的电泳一样。如果不是升得非常高（如果是太高可能是体系的buffe不够，干掉了）就没事。这么大的蛋白不存在转过的问题 ...

虽然我还是没有做出来，疑似机器出故障了，不过根据你的解释还是对原理更了解了些，谢谢！准备开始湿转。求好运
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-07 15:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 6/300 2026-08-25 00:11 by BZKMTicpDhFj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭