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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于酶切位点
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thinkerboy

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切位点 已有9人参与

我最近设计了一对引物，在引物外加了酶切位点GGGCCCTGATG,其中GGGCCC是酶切位点，从GC之间切开，ATG是起始密码子，在ATG之前加了个TG这会导致移码突变么，这会不会导致我的蛋白表达不出来，求做过的大神指点指点。
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1楼 2013-12-23 18:14:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shui_hanliu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
thinkerboy: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-24 13:32:22
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:29:04
你都不加保护碱基的么，这样压根就切不开连不到载体上去，除非你用T载，另外，只要前面没有起始密码子就一般不会移码，要是前面就开始翻译了，那就要三个一组，ATG必须在一组内
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4楼2013-12-23 18:44:55
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普通回帖

秦守成

铁杆木虫 (著名写手)

秦博

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 00:27:54
thinkerboy: 金币+2 2013-12-24 13:32:29
自认为不会影响。
原因：由于没有破坏其它集团

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开心快乐过一生
2楼2013-12-23 18:36:10
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
thinkerboy: 金币+2 2013-12-24 13:32:34
接入酶切位点后需要结合自己载体分析下是否会移码……
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3楼2013-12-23 18:42:47
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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thinkerboy: 金币+2 2013-12-24 13:32:54
ATG 前的碱基不会参与转录的，你设计的引物没问题的。好运！
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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
5楼2013-12-23 19:22:57
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
新手啊。要保护碱基啊。这个你先看看公司的PCR产物直接酶切到设计规律。

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6楼2013-12-23 19:51:48
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这两个碱基在ATG之前，不会影响。你学过分子生物学吗？不会学以致用吗？

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7楼2013-12-23 19:54:18
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:13:39
你加的这两个碱基是保护碱基吧，话说~~你为什么不在酶切位点左侧加保护碱基？？不会是避免引物内的颈环结构吧~，如果不是你加的这两个碱基完全没必要嘛~~
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大家相互帮助哈
8楼2013-12-24 00:36:13
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zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:29:32
酶切位点前面要加保护碱基；如果你的ATG前面没有载体的ATG, 那么翻译就没问题。
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我是胖虎，我是孩子王！
9楼2013-12-24 02:02:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-12-24 12:12:04
gyesang: 回帖置顶 2013-12-24 12:12:06
thinkerboy: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-24 13:32:13
如果你的载体的N端没有其他融合表达标签就不存在移码问题。不过，最好检查一下启动子后到目的基因前面是否还有其他ATG。
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10楼2013-12-24 02:07:20
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