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嗰叽嗰叽

金虫 (小有名气)

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[求助] 大肠杆菌为模板，想P其中一段基因，是提取它的基因组再PCR还是直接菌液PCR？已有1人参与

如题，谢谢大家帮助回答！

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Wearehereandwearewating.

1楼2013-12-19 20:01:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:28:22

引用回帖:

8楼: Originally posted by 嗰叽嗰叽 at 2013-12-26 16:17:13
是不是因为菌液里有培养基，杂菌等影响后续实验？求指教...

菌液PCR重复性很差，菌液PCR其实就是通过高温变性这一步把细胞裂解掉使其DNA暴露释放出来，用释放出来的基因组做模板的PCR反应，但是由于你加的菌体浓度和菌体生长状态不同，你每次菌液PCR实际上模板的浓度都是不一样的！~模板浓度的忽高忽低又反过来影响你的整个PCR反应的效果~，也就是说你有时候能P出来，你有时候就完全有可能P不出来~~有时候量多有时候量少，这种存在无法重复出来风险的PCR，你会把他作为你下一步实验的出发点吗？
而且如果你的实验一开始是用菌落PCR拿的基因，别人完全有理由质疑你实验的可靠性，就算你后续实验上T载体测序正确，也会给人一种你的实验很缺乏严谨性的印象。会给自己制造一些不必要的麻烦~~