应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助，镍柱纯化蛋白，蛋白挂不上去
181/2返回列表12下一页
查看: 3913  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wzp9012

铁虫 (著名写手)

[求助] 求助，镍柱纯化蛋白，蛋白挂不上去 已有8人参与

小弟最近在做酶的纯化，用的康为世纪的镍柱，结果蛋白吸附不上去，结果流经液里蛋白浓度高，而且酶活挺高，洗脱液里反而很少。平衡液咪挫浓度为10mmol/l，洗脱液咪挫浓度为500mmol/l。后来听朋友说平衡液咪挫浓度再低点，结合的力强点，咪挫调整到5mmol/l，貌似还是上述情况。望有经验的师兄师姐多指点指点
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-19 10:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

kunge1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-20 15:25:41
咪唑浓度这么低还上不去 建议重新设计载体 或者变复性吧 估计是组氨酸标签在蛋白内部了
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-12-20 05:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你用无咪唑的buffer上样，有时标签结合力很弱
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-12-20 13:02:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是His标签没有表达？你P片段时，TAA没有去掉？
赞一下(1人) 回复此楼
男人，就要对自己狠一点！
7楼2013-12-20 13:25:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以多设置几个洗脱浓度。
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-19 13:14:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allen206

银虫 (小有名气)
是原核表达的么？变形记处理一下看能不能挂柱？能的话就是空间结构的问题，换标签位置
赞一下 回复此楼
不想说什么，，，，
4楼2013-12-20 09:40:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
冲洗用1mM的咪唑试试，用你平时的buffer量加倍冲洗

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-20 11:24:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzp9012

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-12-20 13:02:50
建议你用无咪唑的buffer上样，有时标签结合力很弱

恩，准备用无咪挫的的buffer上样试试，但请问洗去杂蛋白时用什么，之前含10mmol/l的咪挫的平衡液吗
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-20 19:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzp9012

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Allen206 at 2013-12-20 09:40:07
是原核表达的么？变形记处理一下看能不能挂柱？能的话就是空间结构的问题，换标签位置

是的，大肠杆菌表达系统，如果是空间结构变化了那还得重新开始了
赞一下 回复此楼
9楼2013-12-20 20:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzp9012

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 崔士元 at 2013-12-20 13:25:16
会不会是His标签没有表达？你P片段时，TAA没有去掉？

这个还真不清楚，暑假过来时，老师给了12个种突变种，我就诱导表达纯化的，要怎样检查his标签有没有表达，要Western Blot吗？
赞一下 回复此楼
10楼2013-12-20 20:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wzp9012 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭