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wzp9012

铁虫 (著名写手)

[求助] 求助,镍柱纯化蛋白,蛋白挂不上去 已有8人参与

小弟最近在做酶的纯化,用的康为世纪的镍柱,结果蛋白吸附不上去,结果流经液里蛋白浓度高,而且酶活挺高,洗脱液里反而很少。平衡液咪挫浓度为10mmol/l,洗脱液咪挫浓度为500mmol/l。后来听朋友说平衡液咪挫浓度再低点,结合的力强点,咪挫调整到5mmol/l,貌似还是上述情况。望有经验的师兄师姐多指点指点
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
冲洗用1mM的咪唑试试,用你平时的buffer量加倍冲洗

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-12-20 11:24:52
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查看全部 18 个回答

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以多设置几个洗脱浓度。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-19 13:14:41
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kunge1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-20 15:25:41
咪唑浓度这么低还上不去 建议重新设计载体 或者变复性吧 估计是组氨酸标签在蛋白内部了
3楼2013-12-20 05:48:29
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Allen206

银虫 (小有名气)

是原核表达的么?变形记处理一下看能不能挂柱?能的话就是空间结构的问题,换标签位置
不想说什么,,,,
4楼2013-12-20 09:40:07
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