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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助，镍柱纯化蛋白，蛋白挂不上去
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by wzp9012 at 2013-12-20 19:59:19
恩，准备用无咪挫的的buffer上样试试，但请问洗去杂蛋白时用什么，之前含10mmol/l的咪挫的平衡液吗...

既然你用10mM咪唑平衡液，蛋白都不挂柱，洗杂的时候就要用比10低的，建议拉个线性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2013-12-21 09:11:05
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以设计引物，把His标签那段P出来测序，看看有没有六个组氨酸序列
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男人，就要对自己狠一点！
12楼2013-12-22 17:14:07
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不对，是看没有TAA，如果有TAA，就是His标签没表达
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男人，就要对自己狠一点！
13楼2013-12-22 17:16:29
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344978856

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是可以把蛋白直接用胰蛋白酶溶解上柱子，在洗脱，通过lcms分析多肽，反推回去，避免标签在蛋白内部

[ 发自小木虫客户端 ]
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14楼2013-12-22 17:31:28
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剑客心语

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by wzp9012 at 2013-12-20 20:08:27
这个还真不清楚，暑假过来时，老师给了12个种突变种，我就诱导表达纯化的，要怎样检查his标签有没有表达，要Western Blot吗？...

最好用Western Blot检测一下，这样做灵敏度也高些，先确定HIS有没有表达。
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一柄驻剑，一朝旅人，一颗常心，一生志言……行疆漫漫，品味一生……
15楼2013-12-23 10:36:51
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biology-girl

新虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 崔士元 at 2013-12-22 17:16:29
不对，是看没有TAA，如果有TAA，就是His标签没表达

TAA 那是什么意思？
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16楼2014-06-04 09:01:38
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

来来来来来，哥帮你，在样品里加2mM 巯基乙醇  可能会有意想不到的效果哟
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17楼2014-06-05 17:16:58
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minamina96

禁虫
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18楼2022-08-05 16:07:34
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