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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by wzp9012 at 2013-12-20 19:59:19
恩,准备用无咪挫的的buffer上样试试,但请问洗去杂蛋白时用什么,之前含10mmol/l的咪挫的平衡液吗...

既然你用10mM咪唑平衡液,蛋白都不挂柱,洗杂的时候就要用比10低的,建议拉个线性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
11楼2013-12-21 09:11:05
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以设计引物,把His标签那段P出来测序,看看有没有六个组氨酸序列
男人,就要对自己狠一点!
12楼2013-12-22 17:14:07
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不对,是看没有TAA,如果有TAA,就是His标签没表达
男人,就要对自己狠一点!
13楼2013-12-22 17:16:29
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344978856

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是可以把蛋白直接用胰蛋白酶溶解上柱子,在洗脱,通过lcms分析多肽,反推回去,避免标签在蛋白内部

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2013-12-22 17:31:28
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剑客心语

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by wzp9012 at 2013-12-20 20:08:27
这个还真不清楚,暑假过来时,老师给了12个种突变种,我就诱导表达纯化的,要怎样检查his标签有没有表达,要Western Blot吗?...

最好用Western Blot检测一下,这样做灵敏度也高些,先确定HIS有没有表达。
一柄驻剑,一朝旅人,一颗常心,一生志言……行疆漫漫,品味一生……
15楼2013-12-23 10:36:51
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biology-girl

新虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 崔士元 at 2013-12-22 17:16:29
不对,是看没有TAA,如果有TAA,就是His标签没表达

TAA 那是什么意思?
16楼2014-06-04 09:01:38
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

来来来来来,哥帮你,在样品里加2mM 巯基乙醇  可能会有意想不到的效果哟
17楼2014-06-05 17:16:58
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本帖内容被屏蔽

18楼2022-08-05 16:07:34
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