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求助关于相对定量PCR的几个问题，在线等啊 已有1人参与
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明天要做相对定量PCR，目前出现几个问题，头疼啊。 1，内参基因到底需要几个，有说需要两个的，我很郁闷？ 2，需不需要做标准曲线，做标曲的目的是什么？如果需要做的话内参根目的基因的都要做吗？ 3 ，内参基因的CT值是多少才算合适，看网友说的有些迷茫，问题越来越多啊%>_<% 4 ，需不需要调整cdna浓度，使几个样品的初始浓度一致？这样做的目的是什么，不是有内参吗，为什么还要调初始浓度。 |
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gyesang
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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1，内参基因到底需要几个，有说需要两个的，我很郁闷？ 一般一个就足够了 2，需不需要做标准曲线，做标曲的目的是什么？如果需要做的话内参根目的基因的都要做吗？ 标准曲线可以测试引物的扩增效率，都要做 3 ，内参基因的CT值是多少才算合适，看网友说的有些迷茫，问题越来越多啊%>_<% 内参基因的Ct值一般比较小，12-18个之间比较正常 4 ，需不需要调整cdna浓度，使几个样品的初始浓度一致？这样做的目的是什么，不是有内参吗，为什么还要调初始浓度。 cDNA浓度无法调整，你可以用相同量的RNA进行逆转录，这样出来的内参Ct值基本是一样的，如果不一样，你的实验过程有问题 |
2楼2013-12-15 01:05:27
3楼2013-12-15 11:55:53