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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌DNA提取
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love_糖糖

金虫 (正式写手)

[求助] 真菌DNA提取 已有3人参与

我用液氮研磨法提取曲霉DNA提了几次都没提出来，个人认为应该不难啊，不知道哪个步骤操作不当？我用的是天根的植物试剂盒，液体培养的，按照操作步骤一次也没成功，跑电泳根本就看不到带，各位大侠有什么好的建议么？跪谢了先。。。
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1楼 2013-12-13 11:46:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

1095314666

金虫 (小有名气)
如果是曲霉的话，还是用液体培养成菌丝球提DNA比较好，不管是过滤还是离心还是用蒸馏水洗几次比较好，因为培养基中的成分，可能会影响DNA的提取，用天根植物提取DNA试剂盒足矣，研磨时菌丝多一点比较好，且菌丝球的水分最好用滤纸吸干，也就是半干状态，这样研磨效果最好。
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路在脚下。
9楼2013-12-15 22:55:33
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物

【答案】应助回帖

★
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love_糖糖: 金币+1, ★有帮助 2013-12-14 20:43:53
霉菌的话通常是平板上培养吧，取菌的丝状体或子实体提取，一般酵母才直接液体提！
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2楼2013-12-13 12:33:23
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love_糖糖

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肥猫p at 2013-12-13 13:31:18
国产试剂盒效果一般都不怎么好。所以你得先加液氮研磨成菌粉再使用试剂盒提基因组。国外有比较好的试剂盒，从平板上挂下菌丝就能直接提取，但是好贵，50次2k多

国外的试剂盒我就不指望了，老板不乐意给买。只是不明白为什么一点都提不出来，真是急死了。
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4楼2013-12-13 14:59:59
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lydoctor

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
love_糖糖: 金币+2, ★有帮助 2013-12-14 20:44:53
我之前用过宝生物的一个简易提取方法，那个试剂可以对很多微生物都可以，真菌，阴性菌，阳性菌，名字是Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR，不过是用固体培养基上的一点点纯菌落提取的。不过这种方法是粗提，估计直接电泳的话不行，我就单单做PCR用，效果还是不错的。
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6楼2013-12-13 18:37:00
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love_糖糖

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lcat at 2013-12-13 21:59:23
我们以前这么提过，应该是没问题的啊。液体培养是没有问题的，有菌丝就可以提到DNA啊，固体平板上还要往下刮。
你研磨的是不是不够细啊，再就是菌丝的量是不是太多太少了？真想不到其它原因了。一般跑电泳的话在几 ...

想的也是研磨的时候没研好，再多试试吧！多谢了
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8楼2013-12-14 20:42:39
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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love_糖糖: 金币+2, ★有帮助 2013-12-14 20:43:07
国产试剂盒效果一般都不怎么好。所以你得先加液氮研磨成菌粉再使用试剂盒提基因组。国外有比较好的试剂盒，从平板上挂下菌丝就能直接提取，但是好贵，50次2k多
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3楼2013-12-13 13:31:18
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love_糖糖

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-12-13 12:33:23
霉菌的话通常是平板上培养吧，取菌的丝状体或子实体提取，一般酵母才直接液体提！

是么？我一直想在平板上养来着，带我那个小老师一直反对，坚持用液体养。不过你的建议我可以试一试，提出来才能进行下一步啊
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5楼2013-12-13 15:02:53
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lcat

木虫 (小有名气)
我们以前这么提过，应该是没问题的啊。液体培养是没有问题的，有菌丝就可以提到DNA啊，固体平板上还要往下刮。
你研磨的是不是不够细啊，再就是菌丝的量是不是太多太少了？真想不到其它原因了。一般跑电泳的话在几十k大小的位置。
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7楼2013-12-13 21:59:23
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love_糖糖

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 1095314666 at 2013-12-15 22:55:33
如果是曲霉的话，还是用液体培养成菌丝球提DNA比较好，不管是过滤还是离心还是用蒸馏水洗几次比较好，因为培养基中的成分，可能会影响DNA的提取，用天根植物提取DNA试剂盒足矣，研磨时菌丝多一点比较好，且菌丝球的 ...

谢谢您的建议。操作过程中，哪个因素影响最大呢？我以前不是学这个的，是不是有些关键地方让我忽略了呢？
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10楼2013-12-17 11:17:03
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