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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌DNA提取
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金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by love_糖糖 at 2013-12-17 19:23:40
我是按照试剂盒的操作步骤来的，大体是这样：
1．取菌丝体放进研钵加入液氮充分碾磨。
2．将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μl 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒 ...

你这个是试剂盒的操作方法，我们做的时候对这个有改动，在2步时候加入巯基乙醇，目的是去色素，在第10步，我们是每次加50微升，放置2min后离心，这样做两次，不知道你在要求的提取液中有没有加乙醇，还有在研磨的时候你是用菌丝，还是液体培养的菌丝球，还有你的菌丝或者菌丝球干燥程度。
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路在脚下。
21楼2013-12-18 16:16:33
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mengtaji

木虫 (小有名气)
一般液体培养，再加上试剂盒提取是没有问题的，
1. 这条可能说的有点多余，，试剂盒里面是不是有需要添加的东西，有没有按量添加
2. 菌丝体过滤出来以后要用无菌水冲洗一下然后滤纸把水分吸干，水分吸干了再加入液氮才可以研磨充分，一定要研磨充分
3. 个人认为，提DNA的时候不要加入太多菌丝体进去，可能会裂解不完全，

祝好运
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天道酬勤
22楼2013-12-18 21:38:07
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by love_糖糖 at 2013-12-17 22:50:49
说的是呢！但是CTAB法具体操作步骤是什么呢？我查了下，各个说法不尽相同，不知道该用哪个。环顾了下实验室，貌似CTAB还要现买。。。...

不管什么方法，不要停，一个个的试一遍你就知道了

[ 发自小木虫客户端 ]
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23楼2013-12-18 21:51:00
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love_糖糖

金虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by mengtaji at 2013-12-18 21:38:07
一般液体培养，再加上试剂盒提取是没有问题的，
1. 这条可能说的有点多余，，试剂盒里面是不是有需要添加的东西，有没有按量添加
2. 菌丝体过滤出来以后要用无菌水冲洗一下然后滤纸把水分吸干，水分吸干了再加入液 ...

谢谢。想了想可能是水分没吸干，研磨的时候破碎不充分，我再试试。多谢
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24楼2013-12-19 11:35:16
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love_糖糖

金虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by Fleaves at 2013-12-18 21:51:00
不管什么方法，不要停，一个个的试一遍你就知道了
...

好的，试试试试……
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25楼2013-12-19 11:39:50
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liu123kuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by love_糖糖 at 2013-12-14 20:42:39
想的也是研磨的时候没研好，再多试试吧！多谢了...

请问研磨的时候应该注意什么呢？？？
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天道酬勤
26楼2016-04-11 15:03:00
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