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1095314666

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by love_糖糖 at 2013-12-17 19:23:40
我是按照试剂盒的操作步骤来的,大体是这样:
1.取菌丝体放进研钵加入液氮充分碾磨。
2.将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μl 65℃预热缓冲液GP1的离心管中(实验前巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒 ...

你这个是试剂盒的操作方法,我们做的时候对这个有改动,在2步时候加入巯基乙醇,目的是去色素,在第10步,我们是每次加50微升,放置2min后离心,这样做两次,不知道你在要求的提取液中有没有加乙醇,还有在研磨的时候你是用菌丝,还是液体培养的菌丝球,还有你的菌丝或者菌丝球干燥程度。
路在脚下。
21楼2013-12-18 16:16:33
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mengtaji

木虫 (小有名气)

一般液体培养,再加上试剂盒提取是没有问题的,
1. 这条可能说的有点多余,,试剂盒里面是不是有需要添加的东西,有没有按量添加
2. 菌丝体过滤出来以后要用无菌水冲洗一下然后滤纸把水分吸干,水分吸干了再加入液氮才可以研磨充分,一定要研磨充分
3. 个人认为,提DNA的时候不要加入太多菌丝体进去,可能会裂解不完全,

祝好运
天道酬勤
22楼2013-12-18 21:38:07
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by love_糖糖 at 2013-12-17 22:50:49
说的是呢!但是CTAB法具体操作步骤是什么呢?我查了下,各个说法不尽相同,不知道该用哪个。环顾了下实验室,貌似CTAB还要现买。。。...

不管什么方法,不要停,一个个的试一遍你就知道了

[ 发自小木虫客户端 ]
23楼2013-12-18 21:51:00
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love_糖糖

金虫 (正式写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by mengtaji at 2013-12-18 21:38:07
一般液体培养,再加上试剂盒提取是没有问题的,
1. 这条可能说的有点多余,,试剂盒里面是不是有需要添加的东西,有没有按量添加
2. 菌丝体过滤出来以后要用无菌水冲洗一下然后滤纸把水分吸干,水分吸干了再加入液 ...

谢谢。想了想可能是水分没吸干,研磨的时候破碎不充分,我再试试。多谢
24楼2013-12-19 11:35:16
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love_糖糖

金虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by Fleaves at 2013-12-18 21:51:00
不管什么方法,不要停,一个个的试一遍你就知道了
...

好的,试试试试……
25楼2013-12-19 11:39:50
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liu123kuan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by love_糖糖 at 2013-12-14 20:42:39
想的也是研磨的时候没研好,再多试试吧!多谢了...

请问研磨的时候应该注意什么呢???
天道酬勤
26楼2016-04-11 15:03:00
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