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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达问题
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天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有2人参与

各位虫友，我用的是毕赤酵母Gs115表达外源蛋白，载体是pPIC9K，第一次筛选时选得两株株表达量高的，但是斜面保藏后，再进行表达时，发现表达量急剧减少，重复好几次都是，表达量没起始的高，都快一个月了，求大神指点。。。。。
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自信加努力成就人生
1楼 2013-12-12 10:29:43
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天马0825

银虫 (小有名气)
没人应答  自己先顶一下
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自信加努力成就人生
2楼2013-12-13 08:51:54
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是保藏过程中的问题，为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化，保藏的培养基是否有加抗生素？可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。
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3楼2013-12-13 16:36:53
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-13 16:36:53
是保藏过程中的问题，为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化，保藏的培养基是否有加抗生素？可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。

谢谢！斜面保藏主要是使用时方便，还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的，应该很稳定，载体使用的是缺陷型筛选，不用添加抗生素的。
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自信加努力成就人生
4楼2013-12-16 13:27:55
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achillesyao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-16 13:27:55
谢谢！斜面保藏主要是使用时方便，还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的，应该很稳定，载体使用的是缺陷型筛选，不用添加抗生素的。...

pPIC9K不是氨苄青霉素吗？转进染色体也会丢失，因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆，其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围，一旦条件回复，菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基？
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5楼2013-12-16 17:16:48
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-16 17:16:48
pPIC9K不是氨苄青霉素吗？转进染色体也会丢失，因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆，其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围，一旦条件回复，菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基？...

你好，是有氨苄抗性 ，那是在大肠里，在酵母里，靠的是组氨酸缺陷型筛选！
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自信加努力成就人生
6楼2013-12-18 23:45:16
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-12-24 18:08:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-18 23:45:16
你好，是有氨苄抗性 ，那是在大肠里，在酵母里，靠的是组氨酸缺陷型筛选！...

我的意思是可以都用上，组氨酸也好氨苄也好，都用来筛选一边。酵母也可以用抗生素筛选的嘛，试试呗。
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天马0825
7楼2013-12-21 13:16:00
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

别人给你回答的挺好，不知道你为什么那么倔强

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2013-12-21 15:11:50
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天马0825

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-21 13:16:00
我的意思是可以都用上，组氨酸也好氨苄也好，都用来筛选一边。酵母也可以用抗生素筛选的嘛，试试呗。...

嗯  我知道什么意思了 谢谢哈！
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自信加努力成就人生
9楼2013-12-23 21:16:26
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achillesyao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-23 21:16:26
嗯  我知道什么意思了 谢谢哈！...

希望能帮到你。不客气。
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10楼2013-12-24 10:24:22
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