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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达问题
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jjwhl

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-23 21:16:26
嗯  我知道什么意思了 谢谢哈！...

楼主，我也是做毕赤酵母表达的，想问一下，在摇瓶水平下，你的目的蛋白表达量达到多少mg/L呢？还有，你是怎么筛选高酶活转化子的呢？
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11楼2014-12-21 20:24:26
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jjwhl at 2014-12-21 20:24:26
楼主，我也是做毕赤酵母表达的，想问一下，在摇瓶水平下，你的目的蛋白表达量达到多少mg/L呢？还有，你是怎么筛选高酶活转化子的呢？...

我们直接测的酶活，单位U/mL。先用G418筛选高拷贝，再去表达
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自信加努力成就人生
12楼2014-12-22 16:47:39
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WL大人

铜虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-24 10:24:22
希望能帮到你。不客气。...

Amp抗性对真核生物无效，楼主是酵母菌..
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13楼2014-12-22 18:19:12
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jjwhl

银虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 天马0825 at 2014-12-22 16:47:39
我们直接测的酶活，单位U/mL。先用G418筛选高拷贝，再去表达...

G418筛选你们是怎么做的？挑菌，还是用G418洗平板的方式啊?
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14楼2014-12-23 20:28:48
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jjwhl at 2014-12-23 20:28:48
G418筛选你们是怎么做的？挑菌，还是用G418洗平板的方式啊?...

配置含不同浓度G418的平板，进行筛选。
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自信加努力成就人生
15楼2014-12-24 09:39:10
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jjwhl at 2014-12-23 20:28:48
G418筛选你们是怎么做的？挑菌，还是用G418洗平板的方式啊?...

配置含不同浓度G418的平板，挑菌点样平板进行筛选。
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自信加努力成就人生
16楼2014-12-24 09:40:58
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